24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 5708  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

夏菡小屋

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR加各种反应溶液时为什么要在冰浴环境中进行??已有11人参与

最近在做实验时,遇到了一些疑问..查了一些资料 说法不一...希望大家给个准确点的答复..嘻嘻
主要原因是因为1.Taq酶以及引物在常温下易变性而导致失活
还是 2.在常温下,引物就会在tap的作用下发生反应,发生错配产生错误的PCR产物
还是3.在冰上做能保持扩增的特异性
感觉都有道理..但是和老师交流了一下,老师只是笑了笑,让我回来查资料..不解啊..
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Liu19851225

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
主要还是防止降解,引物,模板和酶都容易降解,另外酶以及扩增体系中的BUFFER最好都放冰上,加完了混匀直接放入PCR仪扩增。
12楼2020-07-22 15:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

hkfgwww

银虫 (正式写手)

PCR哪有这么复杂的,常温下没有问题的,除非高保真酶。
微生物发酵
2楼2010-11-10 14:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-10 16:11:08
你列举的三点都是有道理的,但实际实验过程中只要在室温下操作就可以了,记得把所有东西加完后最后再把酶拿出来加上。如果你不是在做实验的时候速度奇慢,那上面的三点对实验结果基本没什么影响
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2010-11-10 14:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

langduiyue

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-10 23:13:31
我觉的 那是相对于以前非热激活酶而言,pcr时温度能达到90多度,常温降解 有点扯,又不是长时间放在常温下。我们一直是常温做pcr 也没见有啥不妥。    到底是不是低温更好,也请高手指点
角逐自我
4楼2010-11-10 16:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见