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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

你用的什么条件哦?
11楼2010-11-05 19:49:39
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by sayfxxk2u at 2010-11-05 10:33:53:

SOE-PCR,是不是可以互为引物模板?那不是不用加我自己设计的引物了?

对长片段,你自己设计引物还是必要的。如果你的两段序列都不长,比如几十bp,你就可以全合成。合成的时候设计一段互补配对的区段。就不用引物了。
生物资源交流QQ群:1044518333
12楼2010-11-05 20:04:06
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云泽紫樱

银虫 (小有名气)

sayfxxk2u(金币+1):谢谢告诉 2010-11-19 16:00:42
引用回帖:
Originally posted by sayfxxk2u at 2010-11-05 10:35:48:

当时查的说12个bp就够了,所以设计了12bp的引物,如果这样,还得再设计引物,然后重新PCR 2个基因,再联合?
你的那个退火的温度和PCR策略是?

退火温度是58℃,30s。
1.94℃,2min
2.94℃,30s
3.58℃,30s
4.72℃,4min。2-4循环30次。用的是pfu DNA polymerase

我觉得设计引物是主要是互补的那段序列的方向要特别注意,我设计的时候互补序列的方向仔细弄了弄。

希望能帮到你~
“幸福”就是猫吃鱼,狗吃肉,奥特曼打小怪兽~
13楼2010-11-08 15:49:10
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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-11-05 20:04:06:

对长片段,你自己设计引物还是必要的。如果你的两段序列都不长,比如几十bp,你就可以全合成。合成的时候设计一段互补配对的区段。就不用引物了。

引物设计出来,2个互补的序列是配对的。我现在已经把B段2500bp的,用一个中间引物弄成了B1和B2,B1是1030,B2是1480左右。然后用A和B1为模板,A上和B1下为引物,PCR出来,模板A:B1=0.4ul:0.6ul。然后有一条大于1000bp的带(A-260bp+B1-1030bp=1400bp)和一个小于1000的带。取1400的带,PCR后的纯化产物AB1,和B再一个条件混合,以A上和B下引物,PCR。。现在问题是这2个模板有1030bp的重合,能否P出?
14楼2010-11-19 17:16:58
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