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sayfxxk2u

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR问题求解,2段基因连接

做PCR,用1上1下引物P出来一个基因,250bp,然后用2上2下p出另外一个基因,2500bp。现在我如何把这2个基因连接起来为模板继续p?
我的做法是把1下和2上这两个引物设计成有12个bp的互补,让他们p出来的2个基因可以有12个碱基的互补,然后再用1上和2下对这个互补的基因进行PCR,但是具体该如何设计呢?P一次,发现是引物2聚体的。。变性和退火温度是如何依据的?
请高手指点。。。
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-05 08:41:22
参考SOE-PCR。
重叠部分可以长一点。
生物资源交流QQ群:1044518333
3楼2010-11-05 01:10:22
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by sayfxxk2u at 2010-11-05 10:33:53:

SOE-PCR,是不是可以互为引物模板?那不是不用加我自己设计的引物了?

对长片段,你自己设计引物还是必要的。如果你的两段序列都不长,比如几十bp,你就可以全合成。合成的时候设计一段互补配对的区段。就不用引物了。
生物资源交流QQ群:1044518333
12楼2010-11-05 20:04:06
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