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jian132678

金虫 (正式写手)

[交流] 用HPLC分离DNA

我第一次用HPLC分离DNA，出了几个峰，因为没有荧光，不好判断哪个峰是真正的DNA。我的DNA有78个碱基，用BIOTIN修饰，有人说应该很快出峰，有人说要很久才出峰，我第一次做，没经验，一下出了三个峰，怎么判断啊！
谢谢！
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1楼 2010-11-02 04:49:42
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Adam_Li

铜虫 (初入文坛)
如果你用的是常用的 水——乙腈流动相的话，样品的出峰时间主要是由亲水性决定的。第一次做的话确实很难分辨哪个是你想要的，因为你要对目标DNA的理化性质，空间结构非常了解，才能确定其亲水性，而且不排除样品中有性质与目标DNA相似的杂质存在。所以还是建议你把几个峰都收集起来，做好标记，然后拿去做质谱，确定哪个峰时你需要的，以后收集的时候就可以直接在那个出峰时间附近直接收集了。
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4楼2010-12-18 12:56:26
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Adam_Li

铜虫 (初入文坛)
jian132678(金币+4, 博学EPI+1):THANKS 2010-12-19 23:28:20
如果你用的是常用的 水——乙腈流动相的话，样品的出峰时间主要是由亲水性决定的。第一次做的话确实很难分辨哪个是你想要的，因为你要对目标DNA的理化性质，空间结构非常了解，才能确定其亲水性，而且不排除样品中有性质与目标DNA的杂质存在。所以还是建议你把几个峰都收集起来，做好标记，然后拿去做质谱，确定哪个峰时你需要的，以后收集的时候就可以直接在那个出峰时间附近直接收集了。
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3楼2010-12-18 12:55:41
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liuwei8999

银虫 (小有名气)
jian132678(金币+4):谢谢！ 2010-12-19 23:28:39
想办法把你的DNA破坏掉，然后再次HPLC哪个峰没了  ，大部分可能就是你要的了。专业知识俺不行，只是个建议
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5楼2010-12-19 09:05:15
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