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Kimi123

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[交流] 【求助/交流】HindIII,NdeI双酶切体系已有4人参与

求助各位大仙,HindIII,NdeI切割PET-22b的双酶切体系与酶切时间,小弟做了半个多月了还没切开

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1楼 2010-10-29 11:20:41

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Originally posted by jackiechubut at 2010-10-29 14:16:20:
pet22载体上这两个酶切切出来的小片段只有110bp左右，所以要想看到的话需要足够的质粒量才可以。或者选择的buffer是否有问题。如果是只看到大片段质粒的话，建议跑胶的时候点个质粒做个对照。

BUFFER是TAKARA公司推荐的共用BUFFER,应该没有问题,全加质粒的话试过,根本切不开

3楼2010-10-29 15:11:32

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-29 15:46:39:
你如何判断没切开？

不加目的基因直接酶连转化能长出菌落就是没切开

5楼2010-10-29 16:11:41

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-29 15:46:39:
你如何判断没切开？

当然在感受态,Amp抗性都作对照不存在问题的情况下

6楼2010-10-29 16:14:28

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Originally posted by smilerion at 2010-10-30 01:54:33:
切没切开可以跑胶看的，切下的片段不胶回收，直接连转当然能长斑了，不知到你回收了么，如果片段较小要多切跑胶才能看到回收。

恩,当然是做过回收的阿

9楼2010-10-31 19:49:06

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