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新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】做过叶绿素法的前辈能不能指点一下

第一次用叶绿素法测小球藻，有些不懂的地方，还请前辈指点
小球藻样品OD680稀释两倍后是0.4左右
1、采用离心法收集细胞，加了20ml藻液离心，收集到的细胞非常少，请问正常情况是要多少样品离心？
2、计算叶绿素a含量的公式中提取液体积和过滤培养物体积分别指的是什么？
用什么工具计量该体积（过滤培养物事指收集到的细胞吗，如果是的话量非常少，怎么准确计量它的体积呢）

附上我预采用的方法
　将培养物摇匀,取适量样品加入0. 2～1. 0 g 的碳酸镁悬浮液,转入离心管中,离心10 min (3 500 r/ min) ,去除上清液,收集细胞。
　　将收集到的细胞,转入匀浆器或研钵,加2～3mL 90 %的丙酮溶液(9 份体积的丙酮加一份体积的蒸馏水配制而成) ,在室温下研磨3 min。
　　将提取液转入有刻度的具塞离心管中,用约1mL 90 %的丙酮溶液洗匀浆器或研钵,并将洗涤液倒入上述离心管中,如此重复1～2 次,最后定容为10 mL ,离心3 min (3 500～4 000 r/ min) ,静置1～2min ,以上操作均需在暗处进行。
　　取上层清液,用光径为1 cm 的比色皿在750nm ,669 nm ,645 nm ,630 nm 波长处分别测定它们的光密度。结果如表1～表4 所示。为减少试剂以及操作引起的误差,取按上述过程制备的上清液(无培养物) ,作为比色测定时调节零点的空白对照。此外,为使0. 2 < OD663 < 1 ,应选用不同光径的比色皿或控制稀释度。叶绿素a 、b 和c 分别在663 nm ,645nm ,630 nm 波长处存在吸收峰值。在750 nm 处测得的OD 用于校正浊度。故在计算它们的含量时应对OD 先进行校正,即分别减去OD750

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