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更深的蓝

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接产物电泳


如图,由于孔道有限,没点P双酶切后PCR产物的样,连接产物最下面的一条带就是PCR产物的条带。不知道算不算连接上了。

[ Last edited by 更深的蓝 on 2010-10-28 at 10:30 ]
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hyw1989960 at 2010-10-29 22:03:31
看不懂你的图,一般验证方法是将连接产物转化大肠杆菌,挑阳性克隆,再提质粒做PCR验证和酶切验证

我的是连接出来后转化出了斑,挑斑和摇菌菌液都能得到目的基因的扩增带。但是提取的质粒PCR结果无目的基因带,酶切后条带也不理想。重复了两次还是一样,不知原因?
16楼2013-06-08 16:32:03
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八

更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:07
看不懂你的图,一般验证方法是将连接产物转化大肠杆菌,挑阳性克隆,再提质粒做PCR验证和酶切验证
快乐家族
2楼2010-10-29 22:03:31
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jackiechubut

木虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-30 11:02:32
更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:12
连接产物一般无法直接这样电泳判断的,毕竟有连接上的,有未连接上的,到分子级别,一般电泳是无法检测的。还是转入大肠杆菌中检测筛选出克隆比较好
一笑寂寥空万古,三分明月照大江
3楼2010-10-29 23:50:20
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七


dhd997(金币+1):很活跃,鼓励。 2010-10-30 11:02:41
更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:15
跑胶一般不好确定
要想真正的确定的话 转化挑克隆 菌落PCR  测序
与人玫瑰手有余香
4楼2010-10-30 09:44:26
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