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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接产物，是否可以直接做PCR模板？
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by gylry at 2010-10-27 13:24:13:
我也正想问关于连接的问题呢，请高人指点

可以的 没有问题。 你可以看一下MLPA技术。 这个技术就是先 连探针， 连完以后再做pcr.

做前变一下性，  跑个电泳， 模板稀释到合适的浓度。

菌液都能做pcr, 那成分可是复杂的多
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角逐自我
11楼2010-10-27 14:54:43
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langduiyue

银虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-27 19:57:23
不好意思  引用错了  我是要引用6楼的话。

不过我也知道   pcr 产物能否直接用于TA克隆  还用不用磷酸化
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角逐自我
12楼2010-10-27 14:58:03
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-27 14:33:32:

反向PCR，连接的是酶切的末端，5‘都有磷酸，当然能连上
而测序的那都是在菌里复制过的了，肯定没有nick
而PCR产物直接连接的情况是不一样的

，要我给你上文献么？ 核酸研究杂志上的，1998年的文献。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
13楼2010-10-27 15:42:33
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-27 23:10:05
理论上是可以的，只要有链接好的序列，并以此设计引物，完全没有问题；但是连接的过程会不会有杂条带或者序列的纯度等等，均会影响后面的PCR，这个问题属于验证型的，楼主自己试试不就知道可不可以了吗？不过成功了自然好，不成功的话，原因还是很多的。
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严于律己，宽以待人
14楼2010-10-27 15:59:53
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dqvictory

铁虫 (小有名气)
O(∩_∩)O谢谢各位了！学习了好多！
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把记忆随身携带！
15楼2010-10-27 18:49:32
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)
★
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可以的，本人是连接两个片段，但效率较低，杂条带也多，不过扩出来了
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16楼2010-10-27 22:06:25
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dqvictory

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yzuxhq368 at 2010-10-27 22:06:25:
可以的，本人是连接两个片段，但效率较低，杂条带也多，不过扩出来了

您好，谢谢您了！请问您对连接产物做了什么处理了吗？是直接PCR呢还是？
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把记忆随身携带！
17楼2010-10-27 22:12:35
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连接产物用插入片段PCR得到的产物类似于大片段定点突变。某些添加耐高温DNA连接酶的PCR反应，就是又连接又扩增。
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为什么
18楼2013-07-09 15:24:29
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