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langduiyue

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gylry at 2010-10-27 13:24:13:
我也正想问关于连接的问题呢,请高人指点

可以的 没有问题。 你可以看一下MLPA技术。 这个技术就是先 连探针, 连完以后再做pcr.

做前变一下性,  跑个电泳, 模板稀释到合适的浓度。

菌液都能做pcr, 那成分可是复杂的多
角逐自我
11楼2010-10-27 14:54:43
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langduiyue

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流! 2010-10-27 19:57:23
不好意思  引用错了  我是要引用6楼的话。

不过我也知道   pcr 产物能否直接用于TA克隆  还用不用磷酸化
角逐自我
12楼2010-10-27 14:58:03
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-27 14:33:32:

反向PCR,连接的是酶切的末端,5‘都有磷酸,当然能连上
而测序的那都是在菌里复制过的了,肯定没有nick
而PCR产物直接连接的情况是不一样的

,要我给你上文献么? 核酸研究杂志上的,1998年的文献。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
13楼2010-10-27 15:42:33
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-10-27 23:10:05
理论上是可以的,只要有链接好的序列,并以此设计引物,完全没有问题;但是连接的过程会不会有杂条带或者序列的纯度等等,均会影响后面的PCR,这个问题属于验证型的,楼主自己试试不就知道可不可以了吗?不过成功了自然好,不成功的话,原因还是很多的。
严于律己,宽以待人
14楼2010-10-27 15:59:53
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

O(∩_∩)O谢谢各位了!学习了好多!
把记忆随身携带!
15楼2010-10-27 18:49:32
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以的,本人是连接两个片段,但效率较低,杂条带也多,不过扩出来了
16楼2010-10-27 22:06:25
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yzuxhq368 at 2010-10-27 22:06:25:
可以的,本人是连接两个片段,但效率较低,杂条带也多,不过扩出来了

您好,谢谢您了!请问您对连接产物做了什么处理了吗?是直接PCR呢还是?
把记忆随身携带!
17楼2010-10-27 22:12:35
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547star

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
连接产物用插入片段PCR得到的产物类似于大片段定点突变。某些添加耐高温DNA连接酶的PCR反应,就是又连接又扩增。
为什么
18楼2013-07-09 15:24:29
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