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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌如何冻存？
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peximin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌如何冻存？

各路大侠，新手请教一下：若想用甘油在-20度下冻存大肠杆菌，该是何步骤？
    （是否必须用冻存管，还是一般的离心管就行？
      冻存时细菌的密度及生长期需要什么要求吗？）
   感谢帮助！
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1楼 2010-10-22 17:05:09
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shangming

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):鼓励发帖交流！ 2010-10-22 20:24:13
peximin(金币+2): 2010-10-24 14:36:47
将细菌培养过夜，用普通的EP管就行，10%的甘油900ul+100ul菌液，放在-20的冰箱中就可以了，密度和生长期影响不大
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2楼2010-10-22 17:16:08
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ruanjie910

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking(金币+3):鼓励交流！ 2010-10-22 20:24:47
peximin(金币+2): 2010-10-24 14:42:21
培养细菌，一般12-16个小时（具体条件看细菌类型），去一个1.5mlEP管，50%的甘油和菌液1比1混匀，直接放入-80度冰箱可长期保存。放在-20度太久会影响菌的活性，最好放在-80中。
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3楼2010-10-22 17:36:52
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
peximin(金币+1): 2010-10-24 14:42:29
楼上说得很好。甘油（使用浓度范围为15%-50%） 低温保存法。
甘油和菌液混匀后贮存于-70℃或液氮中。细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。
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4楼2010-10-22 18:45:10
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sg1150cn

木虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-22 20:24:55
1. 要注意混匀
2. 先加 菌液后加甘油
3. 如果你是芽孢菌 最好是保存芽孢
4. 也可以考虑 直接挂菌苔 放到 100%的甘油里
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5楼2010-10-22 19:45:01
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sg1150cn

木虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-10-23 09:12:42
peximin(金币+1): 2010-10-24 14:42:38
另 如果你的菌 活性退化的快 要注意定期活化检测活性
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6楼2010-10-22 19:45:53
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liyan66007

木虫 (正式写手)
★
silicare(金币+1):谢谢分享，欢迎常来生物版 2010-10-23 09:12:57
加甘油保菌，放-80度放个两三年都没事
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7楼2010-10-22 22:01:01
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xuzhizhi16

铜虫 (初入文坛)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 12:02:52
甘油的浓度是在（15%~50%）之间，因为不同浓度的甘油它的隔绝氧气，防冻等方面的能力是不一样的。我曾经做甘油保藏时是用20%的甘油于-70℃下保藏。
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8楼2010-10-23 09:52:00
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peximin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shangming at 2010-10-22 17:16:08:
将细菌培养过夜，用普通的EP管就行，10%的甘油900ul+100ul菌液，放在-20的冰箱中就可以了，密度和生长期影响不大

非常感谢，疑难解决。
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9楼2010-10-24 14:40:07
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