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peximin

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[交流] 【求助/交流】细菌如何冻存？

各路大侠，新手请教一下：若想用甘油在-20度下冻存大肠杆菌，该是何步骤？
（是否必须用冻存管，还是一般的离心管就行？
冻存时细菌的密度及生长期需要什么要求吗？）
感谢帮助！

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1楼 2010-10-22 17:05:09

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shangming

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amisking(金币+1):鼓励发帖交流！ 2010-10-22 20:24:13
peximin(金币+2): 2010-10-24 14:36:47

将细菌培养过夜，用普通的EP管就行，10%的甘油900ul+100ul菌液，放在-20的冰箱中就可以了，密度和生长期影响不大

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2楼2010-10-22 17:16:08

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ruanjie910

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peximin(金币+2): 2010-10-24 14:42:21

培养细菌，一般12-16个小时（具体条件看细菌类型），去一个1.5mlEP管，50%的甘油和菌液1比1混匀，直接放入-80度冰箱可长期保存。放在-20度太久会影响菌的活性，最好放在-80中。

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3楼2010-10-22 17:36:52

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tianhuijuan

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peximin(金币+1): 2010-10-24 14:42:29

楼上说得很好。甘油（使用浓度范围为15%-50%）低温保存法。
甘油和菌液混匀后贮存于-70℃或液氮中。细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。

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4楼2010-10-22 18:45:10

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sg1150cn

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amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-10-22 20:24:55

1. 要注意混匀
2. 先加菌液后加甘油
3. 如果你是芽孢菌最好是保存芽孢
4. 也可以考虑直接挂菌苔放到 100%的甘油里

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5楼2010-10-22 19:45:01

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silicare(金币+1):谢谢参与 2010-10-23 09:12:42
peximin(金币+1): 2010-10-24 14:42:38

另如果你的菌活性退化的快要注意定期活化检测活性

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6楼2010-10-22 19:45:53

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liyan66007

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silicare(金币+1):谢谢分享，欢迎常来生物版 2010-10-23 09:12:57

加甘油保菌，放-80度放个两三年都没事

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7楼2010-10-22 22:01:01

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xuzhizhi16

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-23 12:02:52

甘油的浓度是在（15%~50%）之间，因为不同浓度的甘油它的隔绝氧气，防冻等方面的能力是不一样的。我曾经做甘油保藏时是用20%的甘油于-70℃下保藏。

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8楼2010-10-23 09:52:00

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peximin

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引用回帖:

Originally posted by shangming at 2010-10-22 17:16:08:
将细菌培养过夜，用普通的EP管就行，10%的甘油900ul+100ul菌液，放在-20的冰箱中就可以了，密度和生长期影响不大

非常感谢，疑难解决。

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9楼2010-10-24 14:40:07

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