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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？
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三妹妹

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期，拿出来都是沉淀？？ 已有12人参与

当初纯化完后还很清亮的，未加甘油，放在-20度，放假回来管里都是白色沉淀（蛋白吧），不知道原因？用尿素1：1可以溶解。
尿素溶解后蛋白的活性会受到影响吗？
期待达人帮忙解答一下吧，万分感谢！
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1楼 2010-10-11 11:27:43
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三妹妹

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jingcp200320 at 2010-10-12 16:10:04:
如果你NI柱纯化完成后没有透析，可能析出的是咪唑等盐类，我透析好之后放在4度基本没有问题！

在37度孵育了15分钟，沉淀不溶解；
将沉淀混合物转入透析袋PBS透析，沉淀不溶解；
取上清测蛋白浓度，浓度很低，看来沉淀是蛋白；
将沉淀用8M的尿素溶解，PBS透析，沉淀又回来了...
这次的蛋白被我折腾了个够呛

呵呵，下次我可要记住纯化后就透析，还要加保护剂了
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13楼2010-10-13 15:22:56
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):鼓励热心虫友交流。 2010-10-11 12:11:34
那要看你加的尿素浓度啊，8M的肯定没活性了，低浓度的一般没影响（1-2M），我就常用1M的尿素溶解蛋白，活性没有影响啊。你说的1：1没有提到浓度多大啊，所以很难说。
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2楼2010-10-11 11:55:32
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
三妹妹(金币+2):谢谢那！！ 2010-10-11 13:15:12
至于蛋白沉淀，时间长了别说是-20，就算-80也会沉淀变性啊，再说你也没加保护剂啊。
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3楼2010-10-11 11:57:07
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三妹妹

金虫 (小有名气)
呀呀，不好，我加了8M的尿素，
还好没有全加，剩下的用1M的试试。
沉淀物就是变性了的蛋白吗？
那保护剂一般加什么，除了甘油还有别的吗？
赞一下 回复此楼
4楼2010-10-11 13:13:35
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