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【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌已有3人参与
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| 将目的基因和表达载体用两个限制性酶切后16度过夜连接，后转化DH5α37度过夜培养竟然一个菌也没有长，理论上说即使没有连接成功也应该有空载体转化成功呀，怎么能一个菌也不长呢？求高手指点 |
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12楼2018-12-23 01:06:09
walker2898
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tianyinghu
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lstt09nk(金币+5):不错，欢迎常来~ 2010-10-09 14:18:56
yuanalice(金币+2): 2010-10-10 12:21:35
lstt09nk(金币+5):不错，欢迎常来~ 2010-10-09 14:18:56
yuanalice(金币+2): 2010-10-10 12:21:35
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首先 1，确定你的载体抗性没有错，没有拿错载体，第二回收浓度是多少。 2.你的抗性板有没有弄错 3.上面2点建议做个质粒转化，就拿你做酶切的质粒。再加上你确实的同抗性的其他质粒，看长不长 如果长，那就说明板和载体应该是没问题，如果不长（一个长一个不长或是2个都不长），可能有4个原因， 第一 载体错了 第二 板错了 第三 连接不没连接成功 第四 感受态有问题（2个质粒都不长） 排除以上几点后如果确定是连接没成功，很简单载体酶切后回收下来测个浓度，还有片度，按照适当的比例连接，建议别16度过夜，我一般是用22度2个小时就可以了，16度四小时，或是4度过夜，如果你时间来不急你可以22都连接一段时间然后放到四度，第2天转化，因为很多实验室质粒放过夜会见解的，可能是和用的水有关系。我见过最严重的是2小时质粒就见解的，所以建议你提质粒的时候要注意。 |
4楼2010-10-09 14:17:33