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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】镍柱纯化，洗不下来啊。。。
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dy_414

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】镍柱纯化，洗不下来啊。。。 已有5人参与

本人纯化一株定点突变蛋白，在原有蛋白的His tag末尾加上一个半胱氨酸，经过变性镍柱纯化咪唑洗脱，>80%的蛋白都没有洗下来，其他的蛋白，包括突变前的都可以洗脱的非常好~请问诸位大侠有没有类似的经历或者解决办法啊~~
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我坚信，rp是攒出来的
1楼 2010-10-04 20:58:14
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-10-06 08:34:44
引用回帖:
Originally posted by dy_414 at 2010-10-05 11:31:53:




其他的那些蛋白用300mM都可以的，这个已经加到500mM了，可是还是不行啊。。。

我的感觉和上面的一样，有可能使沉淀了。要不不至于在500mM下洗不下来
LZ换一种buffer试试
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9楼2010-10-06 08:18:18
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flllgend

金虫 (正式写手)
衷心祝福楼主，我为金币而来
赞一下 回复此楼
2楼2010-10-04 21:00:31
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-10-06 08:34:09
dy_414(金币+1): 2010-10-06 11:12:11
引用回帖:
Originally posted by dy_414 at 2010-10-04 20:58:14:
本人纯化一株定点突变蛋白，在原有蛋白的His tag末尾加上一个半胱氨酸，经过变性镍柱纯化咪唑洗脱，>80%的蛋白都没有洗下来，其他的蛋白，包括突变前的都可以洗脱的非常好~请问诸位大侠有没有类似的经历或者解 ...

你的imidozale 的浓度如何？增加看看
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3楼2010-10-05 09:11:12
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kxxin66

金虫 (小有名气)
什么是“变性镍柱”？是指的包含体的变复性吗？如果是的话，可能沉淀在柱子上了或者就没挂柱子直接穿出了。
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4楼2010-10-05 09:31:09
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