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金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化

请教一下：我们实验室最近纯化包涵体时，目的蛋白都在杂蛋白里面，开始怀疑是镍柱用的时间太久了，蛋白挂不上，买了新的镍柱，结果还是出现同样的现象，目的蛋白被洗到杂蛋白里面了，而洗目的蛋白时什么都没有，buffer的ph也调过了，buffer也重配，但仍未解决问题，请问还有什么方法比较有效地纯化包涵体

走自己的路，不要追逐别人的脚步！

1楼 2010-09-26 10:10:52

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银虫 (小有名气)

C-JingX(金币+1):尿素在配制Buffer时都加了的啊 2010-09-30 20:00:55

尿素加否？？

2楼2010-09-29 22:01:52

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至尊木虫 (知名作家)

C-JingX(金币+2):分子量还算大，近98kDa，表达量也还可以 2010-09-30 20:02:55

不知道你的目的蛋白的分子量大小如何？表达效率占整个蛋白的比例？如果表达量比较高的话，可以考虑先用分子筛层析粗分离，然后用离子交换层析及疏水层析进一步纯化。

3楼2010-09-30 08:42:03

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