24小时热门版块排行榜    

查看: 1753  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提高表达蛋白含量 已有5人参与

我用转化的大肠杆菌来收集表达的胆盐水解酶,但是每200ml培养液中收集到的却只有几十微克,具体操作是先试管中过夜培养,然后8ml接种至200ml,培养至OD600约0.5-0.6,加IPTG诱导表达4h,然后离心醇沉,上清:甲醇2:1,醇沉1h,离心收集沉淀,但是几乎没有,用考马斯亮兰法测总蛋白含量约为50微克每毫升左右,如何提高这个蛋白产量呢
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

123q明

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想问你一下,你的胆盐水解酶来自哪里的呀?
11楼2014-11-26 16:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

rtli1672

金虫 (著名写手)

表达量似乎还可以高点


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看起来你的蛋白是表达后分泌到细胞外的,可以试试不同OD600条件,加长表达时间,另外,不知道IPTG加了多少,有时候IPTG可以多加点才能表达的。
2楼2010-09-26 09:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)

IPTG 浓度是0.1mM,试图达到2倍IPTG的量,并没有很明显的提高
3楼2010-09-26 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan66007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做优化,优化诱导时机、培养基、IPTG的浓度、诱导时间,每种都可以做上百个样;或者换个载体试试
4楼2010-09-26 12:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +6 Zhao anqi 2026-03-22 6/300 2026-03-23 09:23 by king123!
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +6 tcxiaoxx 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:23 by edmund7
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +6 生物工程调剂 2026-03-17 10/500 2026-03-22 20:22 by edmund7
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
信息提示
请填处理意见