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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物医学基础 » 【求助】HO33342染色
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mzlfengye

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HO33342染色 已有4人参与

本人将细胞培养到支架材料上后，用HO33342染色细胞后在紫外光下看无蓝色荧光，在绿光下看有红色荧光，请问怎么回事啊？HO33342染色为什么没有出现蓝色荧光啊？急急急！请求各位虫友帮帮忙！

[ Last edited by zhangwj on 2011-5-16 at 20:38 ]
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1楼 2010-09-15 20:59:56
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aegeansyang

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
得确定你有细胞在上面，或的确染上了。。。
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2楼2010-09-15 21:53:15
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mzlfengye

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by aegeansyang at 2010-09-15 21:53:15:
得确定你有细胞在上面，或的确染上了。。。

在荧光显微镜下，用普通倒置就能看到有细胞，我的细胞是贴壁细胞，按理来说在材料上的形状应该和平面培养的形状差不多，菱形。但是怎么都是圆的啊？
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3楼2010-09-16 10:05:24
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silicare

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americanyk(金币+1):谢谢回帖交流 2010-09-16 09:54:03
1，没染上，
2，荧光淬灭，
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4楼2010-09-16 10:18:47
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mzlfengye

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-09-16 10:18:47:
1，没染上，
2，荧光淬灭，

那也有可能是我的染色方法有问题。您能不能告诉我一个比较成熟的染色方法啊！谢谢！
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5楼2010-09-16 10:33:11
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dj04164

木虫 (正式写手)
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americanyk(金币+1):谢谢回帖交流 2010-09-16 09:54:17
americanyk:编辑内容 2010-09-16 10:52
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-09-16 10:18:47:
1，没染上，
2，荧光淬灭，

没染上，淬灭的可能性不大。
两种方法：
1 ho33342过滤灭菌，工作液浓度5ug共培养几个小时.
2 固定后需要穿膜。

[ Last edited by americanyk on 2010-9-16 at 10:52 ]
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6楼2010-09-16 10:37:07
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mzlfengye

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dj04164 at 2010-09-16 10:37:07:

没染上，淬灭的可能性不大。
两种方法：
1 ho33342过滤灭菌，工作液浓度5ug共培养几个小时
2 固定后需要穿膜。

您能不能说详细一点啊，我是学分析化学的，这些不太懂啊。
ho33342染色后的东西我打算拍完照就不要了，所以没有过滤灭菌。我是用10ug/ml的染液和100ug/ml的染液染的，都是染了15min，染完后没有用PBS 冲洗支架，就直接观察的。
还有，为什么要穿膜啊，HO33342不是可以直接进入吗？穿膜怎么操作呢？
谢谢！
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7楼2010-09-16 10:42:29
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mzlfengye

银虫 (小有名气)
各位虫友，能不能帮帮忙啊，我实验卡在这里了，在线等待各位的指点……
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8楼2010-09-16 10:55:33
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dj04164

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
americanyk(金币+1):谢谢回帖交流 2010-09-16 09:54:29
引用回帖:
Originally posted by mzlfengye at 2010-09-16 10:55:33:
各位虫友，能不能帮帮忙啊，我实验卡在这里了，在线等待各位的指点……

trion x100 0.1% pbs稀释，可以用作穿膜
如果没有固定可以先使用多聚甲醛2% 先固定。
ho33324可以直接进去活的细胞膜，没错。不知道细胞是怎么种的。
你先按照上面说的做了吧。应该没问题的。

[ Last edited by dj04164 on 2010-9-16 at 11:12 ]
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9楼2010-09-16 11:09:30
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mzlfengye

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dj04164 at 2010-09-16 11:09:30:

trion x100 0.1% pbs稀释，可以用作穿膜
如果没有固定可以先使用多聚甲醛2% 先固定。
ho33324可以直接进去活的细胞膜，没错。不知道细胞是怎么种的。
你先按照上面说的做了吧。应该没问题的。

[ Last ed ...

我用的是4%的甲醛4度固定15min，实验室没有多聚甲醛。
细胞是直接以浓悬液状态接种到多孔支架材料上去的。
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10楼2010-09-16 11:15:12
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