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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【专题】蛋白新纯化思路探讨
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有钱也不能这样浪费啊。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
11楼2010-09-16 17:03:04
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~ 2010-09-17 17:34:02
我想楼主的目的估计是想通过这种方法一步纯化，那么有几个问题需要考虑：
楼主怎么保证所有的杂蛋白都可以产生预期抗体？
楼主怎么保证所有抗体的偶联效率？
楼主怎么去除脂质、核酸及其他不产生抗体的东东？

楼主估计想做出复合抗体，然后拿来卖，但有个问题，每个外源蛋白蛋白表达时，菌体本底表达并不是都一样的。

而且，我觉得现有的蛋白纯化系统已经足够用了。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
12楼2010-09-16 17:12:22
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cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-16 16:29:27:
我说的1%一点都不算夸张，我身边的人全在做蛋白。以他们纯化的蛋白来看如果单次培养8L菌，纯度在95%目的蛋白能收获20-30mg就算是很不错了，能获得几百毫克的那是极少见（只针对可溶性上清，包涵体对我们的实验没有 ...

嗯 谢谢你的热心帮助
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13楼2010-09-16 17:38:46
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三妹妹

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
大家的交流学习了。
用杂蛋白去免疫制抗体不太可能呀，各种蛋白的量会达不到免疫剂量，即使有些能达到免疫剂量，产生的抗体也可能因亲和力不够而无法用于纯化实验的
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14楼2010-09-17 09:37:07
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-16 16:59:42:
看到你写1%就估计到肯定是可溶表达了，能介绍下你们的研究么，因为还是有蛮多研究只需要包涵体就可以了

蛋白质结晶

隶属结构生物学范畴
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15楼2010-09-18 00:00:43
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
跟现有方法结合起来，去除某些微量的但是又很难除去的杂蛋白还是可以试一试的
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16楼2010-09-18 07:21:00
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ylisa
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
17楼2010-09-18 08:15:57
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-18 00:00:43:



蛋白质结晶

隶属结构生物学范畴

原来这样，怪不得必须要可溶表达的，听说种晶体是件很难的事情，佩服佩服
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18楼2010-09-18 08:32:13
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lovetanyang

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by cgt713 at 2010-09-16 17:38:46:

嗯 谢谢你的热心帮助

同样有此疑问，你是否可以通过更好的研究杂蛋白谱，让所有的蛋白都处于能产生足够量的水平，这样的话说不定是个突破。
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19楼2010-09-18 23:51:15
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蛋白质结晶需要很高的纯度

楼主一定没做过多少纯化和抗体方面的实验，这是死路，那么多，可能是几十种甚至上百种的抗体这样做是做不出来的。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
20楼2010-09-19 02:01:20
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