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【求助】急求：胰岛素浓度检测怎么做啊？ 已有1人参与
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本人是做材料合成的，没学过生物检测，最近要做个胰岛素浓度检测（0~10mg/ml）的实验，有文献里说用Bio-Rad RC DC protein assay kit紫外吸收来测，这个方法我只是听说，虽然自学了一下，但是还是不怎么明白，也有的文献说用Bradford法，是不是跟上面说的是一个方法？求个具体的操作过程！！！ 可以用考马斯亮兰法测吗？下面得操作过程对不对？ （1）取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组分别加入样品、水和试剂，即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用无离子水补充到0.1ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G―250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。 （2）加完试剂2~5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值，空白对照为第1号试管，即0.1mlH2O加5.0mlG―250试剂。 （3）用标准胰岛素量（mg）为横座标，用吸光度值为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品吸收值，即可查出未知样品的含量。 疑问： 标准曲线的绘制用到的标准蛋白质溶液，指的是胰岛素的标准溶液，还是只能是g-球蛋白，比如牛血清蛋白？ [ Last edited by wenruru on 2010-9-14 at 18:12 ] |
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6楼2010-09-15 12:10:28
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