24小时热门版块排行榜    

查看: 4268  |  回复: 14

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很热心,赞~ 2010-09-17 17:08:11
GST柱子最标准的纯化方法就是洗脱下来后通过透析除掉还原性谷胱甘肽,然后加入酶切除标签,再次过柱子。目的蛋白穿透,标签和酶(pre可以)挂在柱子上,实现蛋白的纯化。

我有些时候也在柱上酶切,直接将酶加在柱子上,外加横流泵实现柱上溶液循环流动而实现酶切,这样酶切后目的蛋白就在溶液中,省去透析。但是柱上酶切的效果没有柱下酶切的效果好。

但是如果你的蛋白中还有较多的半胱氨酸,不建议使用GST亲和柱纯化。

至于资料自己到GE官方网站找吧,有各种纯化方法的介绍和使用说明。  在此我列举一本资料的名字  重组蛋白纯化手册  链接我的在本版内发过。
11楼2010-09-17 13:16:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

土质1992

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
个人觉得在柱子上直接分离比较好
12楼2015-12-15 10:05:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q1228321

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-09-14 23:17:07
GST在溶液中一般都是二聚体形式。

一般来说我们酶切后更换至binding buffer中再次过GST柱,标签和酶(pre酶)都挂在柱子上,目的蛋白穿透。

离子交换柱能不能分开要看你蛋白的性质了

你好,我想请教一个问题,我想看看在溶液中我的蛋白是二聚还是单体,我的蛋白的分子量是26KDa,GST空载是25KDa,有一个想法是把GST和我的蛋白都过一个SD75,通过分子筛的出峰位置来看,我想请教的问题是,GST在溶液中一般是二聚体形式,有什么理论依据吗?谢谢
13楼2018-05-28 11:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用purimag的GSH亲和磁珠把GST吸附掉就可以了

发自小木虫IOS客户端
14楼2018-05-29 08:13:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沐夕微暖

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-09-16 11:56:37
直接洗脱的蛋白中还有还原性谷胱甘肽,没法挂在柱子上。必须除掉!...

我最近也在做这个,看到这里想问一下这个酶切后要怎么转至binding buffer?
15楼2020-07-27 10:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 niuniu2010 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +4 曦熙兮 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:01 by JourneyLucky
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 一志愿天津大学,英一数二305分求调剂,四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分,求调剂的学校 +8 Yu先生 2026-03-10 10/500 2026-03-14 01:04 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂(085602一志愿985) +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 材料调剂,307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
信息提示
请填处理意见