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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化？
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月月大可

木虫 (著名写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很热心，赞~ 2010-09-17 17:08:11
GST柱子最标准的纯化方法就是洗脱下来后通过透析除掉还原性谷胱甘肽，然后加入酶切除标签，再次过柱子。目的蛋白穿透，标签和酶（pre可以）挂在柱子上，实现蛋白的纯化。

我有些时候也在柱上酶切，直接将酶加在柱子上，外加横流泵实现柱上溶液循环流动而实现酶切，这样酶切后目的蛋白就在溶液中，省去透析。但是柱上酶切的效果没有柱下酶切的效果好。

但是如果你的蛋白中还有较多的半胱氨酸，不建议使用GST亲和柱纯化。

至于资料自己到GE官方网站找吧，有各种纯化方法的介绍和使用说明。  在此我列举一本资料的名字  重组蛋白纯化手册  链接我的在本版内发过。
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11楼2010-09-17 13:16:52
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土质1992

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人觉得在柱子上直接分离比较好
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12楼2015-12-15 10:05:51
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q1228321

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-09-14 23:17:07
GST在溶液中一般都是二聚体形式。

一般来说我们酶切后更换至binding buffer中再次过GST柱，标签和酶（pre酶）都挂在柱子上，目的蛋白穿透。

离子交换柱能不能分开要看你蛋白的性质了

你好,我想请教一个问题,我想看看在溶液中我的蛋白是二聚还是单体,我的蛋白的分子量是26KDa,GST空载是25KDa，有一个想法是把GST和我的蛋白都过一个SD75，通过分子筛的出峰位置来看，我想请教的问题是，GST在溶液中一般是二聚体形式，有什么理论依据吗？谢谢
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13楼2018-05-28 11:19:40
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用purimag的GSH亲和磁珠把GST吸附掉就可以了

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14楼2018-05-29 08:13:49
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沐夕微暖

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-09-16 11:56:37
直接洗脱的蛋白中还有还原性谷胱甘肽，没法挂在柱子上。必须除掉！...

我最近也在做这个，看到这里想问一下这个酶切后要怎么转至binding buffer?
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15楼2020-07-27 10:23:01
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