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【求助/交流】带GST标签的重组蛋白的纯化？ 已有11人参与
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| 将带GST标签的重组蛋白进行酶切，怎样分离GST标签，目的蛋白及所用的酶切酶？能否用分子筛、跑胶等方法分离且保持目的蛋白的活性？ |
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月月大可
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很热心，赞~ 2010-09-17 17:08:11
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GST柱子最标准的纯化方法就是洗脱下来后通过透析除掉还原性谷胱甘肽，然后加入酶切除标签，再次过柱子。目的蛋白穿透，标签和酶（pre可以）挂在柱子上，实现蛋白的纯化。 我有些时候也在柱上酶切，直接将酶加在柱子上，外加横流泵实现柱上溶液循环流动而实现酶切，这样酶切后目的蛋白就在溶液中，省去透析。但是柱上酶切的效果没有柱下酶切的效果好。 但是如果你的蛋白中还有较多的半胱氨酸，不建议使用GST亲和柱纯化。 至于资料自己到GE官方网站找吧，有各种纯化方法的介绍和使用说明。 在此我列举一本资料的名字 重组蛋白纯化手册 链接我的在本版内发过。 |
11楼2010-09-17 13:16:52
jasco
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2楼2010-09-10 16:56:10
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3楼2010-09-10 22:57:35
5楼2010-09-11 11:00:06