【求助/交流】PCR结果不理想，请教高手。 - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-09-09 16:56:19

bigboy123

铜虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 149.8
散金: 7
帖子: 84
在线: 13.3小时
虫号: 381419
注册: 2007-05-24
专业: 生物大分子结构与功能

andywang6137(金币+3):呵呵，我后面做实验加入看看效果，谢谢！ 2010-09-09 20:26:54

再给个金币吧，最后我那个什么意见绝对管用，呵呵！你不是第一个了。

供应PCR增量剂

12楼2010-09-09 19:15:31

Lee_Py

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 125.5
帖子: 296
在线: 38.9小时
虫号: 1075026
注册: 2010-08-15
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

很明显不能回收你的退火温度有问题（都不知道你引物的Tm值并且你第一个图出现了非特异条带）建议你P个降落或者梯度吧

赞一下(1人)

13楼2010-09-09 22:58:58

lirui8247461

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 23.3
帖子: 13
在线: 6.8小时
虫号: 413482
注册: 2007-06-26
专业: 植物病理学

★ ★
silicare(金币+2):谢谢新虫分享 2010-09-17 22:09:14
silicare:刚发现，您都注册三年了怎么才发了8帖啊 2010-09-17 22:09:42

你可以试试改改PCR的条件：ddH2O 20.5ul 天根Taq buffer 2.5ul 上游引物和下游引物各0.5ul，天根Taq酶0.2ul 模板0.5ul，这样试试看看怎么样。我一直都是这样做的。效果还是不错的

赞一下(2人)

14楼2010-09-17 20:46:57

guanjinyan87

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 159.8
帖子: 117
在线: 33.3小时
虫号: 1403116
注册: 2011-09-15
性别: MM
专业: 生物化学

学习

15楼2012-11-27 21:49:54

rrlgod

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 64
帖子: 12
在线: 119.1小时
虫号: 1116434
注册: 2010-10-08
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

请问你的这个pcr问题解决了吗？我遇到相同的问题，但是之前我的二轮能p出来而且很亮，用以前的一轮pcr产物进行二轮pcr我现在还能重复出来，但是用最近的一轮pcr产物就出现跟你类似的问题了

16楼2013-01-01 03:42:27

andywang6137

木虫 (著名写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1567.5
散金: 309
红花: 25
帖子: 1650
在线: 459.9小时
虫号: 607807
注册: 2008-09-20
专业: 食品加工技术

引用回帖:

2416555楼: Originally posted by rrlgod at 2013-01-01 03:42:27
请问你的这个pcr问题解决了吗？我遇到相同的问题，但是之前我的二轮能p出来而且很亮，用以前的一轮pcr产物进行二轮pcr我现在还能重复出来，但是用最近的一轮pcr产物就出现跟你类似的问题了

产物稀释后做模板

17楼2013-01-01 19:22:51

杜杜

金虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 672.7
帖子: 52
在线: 71.7小时
虫号: 1064863
注册: 2010-07-27

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

第二次pcr的时候，模板量加体系总体积的1/10，循环数3-10个应该可以，试试吧

18楼2013-01-04 09:52:09