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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】蛋白酶抑制剂PMSF的使用问题
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Banana_Li

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopyzxx at 2011-10-17 14:19:13
工作浓度：17~174ug/ml（0.1~1mM），储存液浓度为100或200mM；
用乙醇或异丙醇配制。...

您好，我测定测定酶活，测定乙醇脱氢酶的，中间要用到PMSF，按照这个药品性质来说，我要用乙醇或者异丙醇去溶解PMSF，可是我的反应底物就是乙醇，这个怎么办？
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求助求助，积极汲取知识中~~求指导！
11楼2013-11-08 10:17:06
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by Banana_Li at 2013-11-08 10:17:06
您好，我测定测定酶活，测定乙醇脱氢酶的，中间要用到PMSF，按照这个药品性质来说，我要用乙醇或者异丙醇去溶解PMSF，可是我的反应底物就是乙醇，这个怎么办？...

可以用异丙醇或其他极性试剂。
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生物资源交流QQ群：1044518333
12楼2013-11-08 10:50:56
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by xppcomeon at 2010-09-04 23:29:35
PMSF我都是现配现用，纯化过程中溶液都要加抑制剂

最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白，有时候要纯化一个星期，就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂（包括碘乙酰胺，PMSF,抑肽酶）。一直犹豫要不要补加抑制剂，看了您的回复，想请教一下，我纯化过程中该以何种比例和频率补加抑制剂，抑制剂加多了会不会有副作用，望指教
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13楼2014-06-24 17:28:00
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-24 17:28:00
最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白，有时候要纯化一个星期，就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂（包括碘乙酰胺，PMSF,抑肽酶）。一直犹豫要不要补加抑制剂，看了您的回复，想请教一下，我纯化过程中该以何种比例和 ...

能不加则不加，毕竟是外来物质。
是否需要加，要视情况而定，降解不严重，可以考虑不加。另外如果是外来蛋白酶降解，不是自身讲解，一般在粗纯化阶段添加即可，精纯化阶段可以不加。
我认为，主要还是要严格控制纯化的时间、温度等条件，这些控制不好，即使加，也只能起到小的作用。
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生物资源交流QQ群：1044518333
14楼2014-06-25 20:42:23
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