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Banana_Li

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopyzxx at 2011-10-17 14:19:13
工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1mM),储存液浓度为100或200mM;
用乙醇或异丙醇配制。...

您好,我测定测定酶活,测定乙醇脱氢酶的,中间要用到PMSF,按照这个药品性质来说,我要用乙醇或者异丙醇去溶解PMSF,可是我的反应底物就是乙醇,这个怎么办?
求助求助,积极汲取知识中~~求指导!
11楼2013-11-08 10:17:06
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by Banana_Li at 2013-11-08 10:17:06
您好,我测定测定酶活,测定乙醇脱氢酶的,中间要用到PMSF,按照这个药品性质来说,我要用乙醇或者异丙醇去溶解PMSF,可是我的反应底物就是乙醇,这个怎么办?...

可以用异丙醇或其他极性试剂。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
12楼2013-11-08 10:50:56
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xiaoyu0127

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by xppcomeon at 2010-09-04 23:29:35
PMSF我都是现配现用,纯化过程中溶液都要加抑制剂

最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白,有时候要纯化一个星期,就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂(包括碘乙酰胺,PMSF,抑肽酶)。一直犹豫要不要补加抑制剂,看了您的回复,想请教一下,我纯化过程中该以何种比例和频率补加抑制剂,抑制剂加多了会不会有副作用,望指教
13楼2014-06-24 17:28:00
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaoyu0127 at 2014-06-24 17:28:00
最近我也是在细胞裂解液中纯化蛋白,有时候要纯化一个星期,就只是在细胞裂解时加过蛋白酶抑制剂(包括碘乙酰胺,PMSF,抑肽酶)。一直犹豫要不要补加抑制剂,看了您的回复,想请教一下,我纯化过程中该以何种比例和 ...

能不加则不加,毕竟是外来物质。
是否需要加,要视情况而定,降解不严重,可以考虑不加。另外如果是外来蛋白酶降解,不是自身讲解,一般在粗纯化阶段添加即可,精纯化阶段可以不加。
我认为,主要还是要严格控制纯化的时间、温度等条件,这些控制不好,即使加,也只能起到小的作用。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
14楼2014-06-25 20:42:23
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