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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
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lliu

新虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-09 16:55:23
引用回帖:
Originally posted by cheo163 at 2010-09-09 09:14:31:

这个方法不可行，实验结果显示rat-brain虽然屏蔽掉了rat-brain中25kd的L链，但我的目的带（actin 43kd）也没有了。

你的目的蛋白不是25Kd吗？

如果你选用的单抗是IgG， 那么结果阴性只能说明你提取的蛋白中根本没有目的蛋白，或者二抗失效。没有理由可解释抗鼠Fc二抗不和鼠IgG反应。

另，你可以选用抗鼠K chain二抗试试。如果和内源性IgG 交叉，位置在25Kd，与你的目的蛋白（43Kd）可以区别。
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11楼2010-09-09 10:51:47
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cheo163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2010-09-09 10:51:47:


你的目的蛋白不是25Kd吗？

如果你选用的单抗是IgG， 那么结果阴性只能说明你提取的蛋白中根本没有目的蛋白，或者二抗失效。没有理由可解释抗鼠Fc二抗不和鼠IgG反应。

另，你可以选用抗鼠K chain二抗试试 ...

当然，因为我不确定自己要检测的抗体是阴性还是阳性，所以我用actin抗体作对照，它的大小是43kd。二抗选用G抗M（Fc）
结果是：加原来二抗的有43的带，但加Fc二抗的是空白
......
那个二抗是从别人那里拿来的，我再去验证一下是否失效好了。

[ Last edited by cheo163 on 2010-9-9 at 13:43 ]
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12楼2010-09-09 13:37:45
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