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sean_zhang

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[交流] 【讨论】做HPLC时碰到的问题已有7人参与

走液相的时候，走梯度从0-50min，甲醇从5%-100%，当走到100%的时候，基线就飘上去不下来了，是为什么咧？

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1楼 2010-08-31 09:52:15

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sean_zhang

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by hustyookie at 2010-08-31 16:15:56:
走梯度的时候,水相和有机相的比例一直在变,无法达到平衡状态,基线上飘是必然的.
不过楼上说的对,线性缓一些可以让上飘小一些.

谢谢！

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11楼2010-08-31 17:23:40

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qcsgx

铜虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。