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小妖2005

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 239443

[交流] 影响质粒转染细胞效率的因素有哪些?

各位同僚:
不才想问:"影响质粒转染细胞效率的因素有哪些?(除细胞状态)"

希望有好心人能解答我的疑惑.

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1楼 2006-04-25 12:08:18

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小妖2005

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 239443

谢谢楼上的强人:
我是用HepG2(肝癌细胞),MCF7(乳腺癌细胞)或CV1(非洲绿猴肾细胞),是培养细胞.用的是国产试剂盒.做的是报告基因转染,.我是用内参来表示转染效率,但内参的检测结果不稳定.所以怀疑转染有问题.
因此,我想找出具体的原因.不知是国产试剂盒的原因还是其它未知的原因.

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3楼2006-04-25 23:49:44

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wj_21cn

木虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1640.6
帖子: 366
在线: 9.4小时
虫号: 176376
注册: 2006-02-05
专业: 抗体工程学

★
BlueGuy(金币+1):谢谢回复

要看你用什么方法转的了。

如果是脂质体方法，看看，脂质体类型了。
基本上Lipofectamine 2000，可以统杀。

如果是病毒载体的话，基本上就不会有问题了，效率很高。

同时，要看你转什么细胞，培养细胞，还是组织细胞。

培养细胞要好很多。

你应该把你遇到的问题提出来：）

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2楼2006-04-25 14:53:22

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raindays

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 176117

影响转染效率的因素太多了，以磷酸钙法为例，溶液滴加的速度、冰浴时间、加到细胞中的速度、细胞培养基的血清浓度、促进剂的浓度等都非常重要。细胞的质量非常重要，转染前24小时传代，转染前2小时换液，转染时70－75％细胞单层效果最好。你用的几种细胞很好培养，但转染效率没有293T细胞高。可以用293T试一试。DNA的质量就更不用说了，最好用试剂盒提取。

祝你好运。

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4楼2006-04-26 21:02:44

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