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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 影响质粒转染细胞效率的因素有哪些?
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小妖2005

[交流] 影响质粒转染细胞效率的因素有哪些?

各位同僚:
      不才想问:"影响质粒转染细胞效率的因素有哪些?(除细胞状态)"

      希望有好心人能解答我的疑惑.
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1楼 2006-04-25 12:08:18
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小妖2005

谢谢楼上的强人:
   我是用HepG2(肝癌细胞),MCF7(乳腺癌细胞)或CV1(非洲绿猴肾细胞),是培养细胞.用的是国产试剂盒.做的是报告基因转染,.我是用内参来表示转染效率,但内参的检测结果不稳定.所以怀疑转染有问题.
   因此,我想找出具体的原因.不知是国产试剂盒的原因还是其它未知的原因.
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3楼2006-04-25 23:49:44
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wj_21cn

木虫 (正式写手)
★
BlueGuy(金币+1):谢谢回复
要看你用什么方法转的了。

如果是脂质体方法，看看，脂质体类型了。
基本上Lipofectamine 2000，可以统杀。

如果是病毒载体的话，基本上就不会有问题了，效率很高。

同时，要看你转什么细胞，培养细胞，还是组织细胞。

培养细胞要好很多。

你应该把你遇到的问题提出来：）
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2楼2006-04-25 14:53:22
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raindays

影响转染效率的因素太多了，以磷酸钙法为例，溶液滴加的速度、冰浴时间、加到细胞中的速度、细胞培养基的血清浓度、促进剂的浓度等都非常重要。细胞的质量非常重要，转染前24小时传代，转染前2小时换液，转染时70－75％细胞单层效果最好。你用的几种细胞很好培养，但转染效率没有293T细胞高。可以用293T试一试。DNA的质量就更不用说了，最好用试剂盒提取。

祝你好运。
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4楼2006-04-26 21:02:44
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