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铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】构建超表达载体时引物的设计

现在要构建超表达载体。PCR扩增基因，正向引物是从ATG开始，但这对引物扩增不出基因。所以打算重新设计引物。所以在此想问一下，引物是否可以在ATG的上游设计？如果可以在哪个范围内比较合适？还有，上游是指基因组序列还是必须在UTR区域？请有经验的同学尽量把这三个问题都回答。

1楼 2010-08-26 04:47:47

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新虫 (初入文坛)

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silicare(金币+1):这个很关键 2010-08-26 13:41:22
gdongli8325(金币+2): 2010-08-26 13:53:07

可以在上游设计，但要注意千万不能移码！

3楼2010-08-26 13:15:33

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铁杆木虫 (正式写手)

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silicare(金币+1):谢谢交流 2010-08-26 08:52:57
gdongli8325(金币+3): 2010-08-26 13:52:56

1.完全可以
2.只要是5‘UTR都行
3.mRNA的5’UTR(如果用cDNA为模板)；如果该基因只有1个外显子，则可从基因组中ATG的上游设计引物。

2楼2010-08-26 08:43:29

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