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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】关于蛋白质酶解的问题
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帅博士

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于蛋白质酶解的问题 已有3人参与

蛋白质酶解有没有标准手段？
对于β-酪蛋白的酶解过程，有文献采用加热变性后，再用胰蛋白酶酶解；但最近看到也有文献采用DTT还原变性后，加入IAA烷基化，再采用胰蛋白酶酶解。这两中方法有什么差异？虫子们认为哪个方法好，然后，不变性应当也能酶解吧。

[ Last edited by amisking on 2010-8-25 at 20:47 ]
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1楼 2010-08-25 17:00:35
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hyg海银

新虫 (初入文坛)
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亲，请问现在提的问题解决了么，我现在也在做酶解，也有跟您一样的疑惑~
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2楼2017-03-21 22:04:21
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zxldbnydx

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-22 07:49:50
DTT的加入是为了打开二硫键，再进行酶解的话，酶解更完全。

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3楼2017-03-22 06:57:44
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hyg海银

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3楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 06:57:44
DTT的加入是为了打开二硫键，再进行酶解的话，酶解更完全。

哦，谢谢您~那请问我提取出的蛋白样品是溶解在0.9%Nacl溶液中的，可以直接加入DTT就开始进入酶解阶段么？我看有些方法里并没有加入DTT，酶解第一步就是加入IAA进行烷化反应
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4楼2017-03-22 08:41:19
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hyg海银

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3楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 06:57:44
DTT的加入是为了打开二硫键，再进行酶解的话，酶解更完全。

不变性也能进行酶解么
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5楼2017-03-22 09:25:01
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zxldbnydx

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5楼: Originally posted by hyg海银 at 2017-03-22 09:25:01
不变性也能进行酶解么...

不变性也可以，只是酶解效率低，毕竟有空间位阻，胰蛋白酶专一作用在精氨酸和赖氨酸的羧基端。

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6楼2017-03-22 16:15:56
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zxldbnydx

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4楼: Originally posted by hyg海银 at 2017-03-22 08:41:19
哦，谢谢您~那请问我提取出的蛋白样品是溶解在0.9%Nacl溶液中的，可以直接加入DTT就开始进入酶解阶段么？我看有些方法里并没有加入DTT，酶解第一步就是加入IAA进行烷化反应...

加入IAA的目的是烷基化，也就是把DTT打开的二硫键烷化，防止再次形成二硫键。
并不是把酶加进去就能酶解，你要考虑酶量、温度，体系PH、反应时间等等。

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7楼2017-03-22 16:23:53
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hyg海银

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 16:23:53
加入IAA的目的是烷基化，也就是把DTT打开的二硫键烷化，防止再次形成二硫键。
并不是把酶加进去就能酶解，你要考虑酶量、温度，体系PH、反应时间等等。
...

那请问一般都用哪些方法进行变性呢？加入DTT也是一种变性手段吗
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8楼2017-03-22 17:23:23
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xff0_0

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亲，这个问题的答案你知道了吗？我已经苦恼很久了，各种查也找不到答案，可以告诉我一下吗？万分感谢！
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9楼2018-09-17 19:38:49
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