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帅博士

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于蛋白质酶解的问题已有3人参与

蛋白质酶解有没有标准手段?
对于β-酪蛋白的酶解过程,有文献采用加热变性后,再用胰蛋白酶酶解;但最近看到也有文献采用DTT还原变性后,加入IAA烷基化,再采用胰蛋白酶酶解。这两中方法有什么差异?虫子们认为哪个方法好,然后,不变性应当也能酶解吧。

[ Last edited by amisking on 2010-8-25 at 20:47 ]
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hyg海银

新虫 (初入文坛)


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亲,请问现在提的问题解决了么,我现在也在做酶解,也有跟您一样的疑惑~
2楼2017-03-21 22:04:21
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-22 07:49:50
DTT的加入是为了打开二硫键,再进行酶解的话,酶解更完全。

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
3楼2017-03-22 06:57:44
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hyg海银

新虫 (初入文坛)


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3楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 06:57:44
DTT的加入是为了打开二硫键,再进行酶解的话,酶解更完全。

哦,谢谢您~那请问我提取出的蛋白样品是溶解在0.9%Nacl溶液中的,可以直接加入DTT就开始进入酶解阶段么?我看有些方法里并没有加入DTT,酶解第一步就是加入IAA进行烷化反应
4楼2017-03-22 08:41:19
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hyg海银

新虫 (初入文坛)


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3楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 06:57:44
DTT的加入是为了打开二硫键,再进行酶解的话,酶解更完全。

不变性也能进行酶解么
5楼2017-03-22 09:25:01
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)


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5楼: Originally posted by hyg海银 at 2017-03-22 09:25:01
不变性也能进行酶解么...

不变性也可以,只是酶解效率低,毕竟有空间位阻,胰蛋白酶专一作用在精氨酸和赖氨酸的羧基端。

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
6楼2017-03-22 16:15:56
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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4楼: Originally posted by hyg海银 at 2017-03-22 08:41:19
哦,谢谢您~那请问我提取出的蛋白样品是溶解在0.9%Nacl溶液中的,可以直接加入DTT就开始进入酶解阶段么?我看有些方法里并没有加入DTT,酶解第一步就是加入IAA进行烷化反应...

加入IAA的目的是烷基化,也就是把DTT打开的二硫键烷化,防止再次形成二硫键。
并不是把酶加进去就能酶解,你要考虑酶量、温度,体系PH、反应时间等等。

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
7楼2017-03-22 16:23:53
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hyg海银

新虫 (初入文坛)


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7楼: Originally posted by zxldbnydx at 2017-03-22 16:23:53
加入IAA的目的是烷基化,也就是把DTT打开的二硫键烷化,防止再次形成二硫键。
并不是把酶加进去就能酶解,你要考虑酶量、温度,体系PH、反应时间等等。
...

那请问一般都用哪些方法进行变性呢?加入DTT也是一种变性手段吗
8楼2017-03-22 17:23:23
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xff0_0

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亲,这个问题的答案你知道了吗?我已经苦恼很久了,各种查也找不到答案,可以告诉我一下吗?万分感谢!
9楼2018-09-17 19:38:49
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