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木一木一

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）的测定方法

向各位求助磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）的测定方法，谢谢谢谢！
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1楼 2010-08-25 09:21:28
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
木一木一(金币+1): 2010-08-26 17:02:06
你可以用磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶pyruvic acid carboxylase 作为筛选词 学术搜索 很多的 我之前找过 但是后来没继续 就删掉了
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DOBEST
2楼2010-08-25 09:27:13
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木一木一

新虫 (初入文坛)
谢谢
搜了很多文章，也看了植物生理书上一些方法，但在实际操作过程中还是存在很多问题，重复测定时数值变化幅度很大。今天有个师兄竟然说要把检测液加热到30度，因为酶反应最始温度是30度，他加热后2min吸光值就不变化了，不知道到底要怎么做才能让数值稳定点
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3楼2010-08-26 17:08:42
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lovelylvnan

新虫 (初入文坛)
把你的邮箱发给我，我现在正在做这个，查了好多文献。
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4楼2010-12-17 17:48:55
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yukai513

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3, EPI+1): good！ 2011-04-25 21:57:20
可以通过测定NADH在340nm下的吸光度变化来测定酶活，反应液中以PEP为底物，加入下一步催化反应酶苹果酸脱氢酶，苹果酸脱氢酶催化草酰乙酸生成苹果酸消耗NADH，通过这个消耗NADH的变化来测定PEPC的酶活。我暂时用高效液相色谱测定草酰乙酸含量呢，效果也不是很好。
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5楼2011-04-25 21:13:46
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君心可晴

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
补充楼上：此方法也可用来测定磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶的活性，原理相同。另外，此反应的终止试剂为ATP, 氯化锰和草酰乙酸。实验终止后方进行吸光度的测定。
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6楼2011-12-06 19:26:58
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jiaoliu007

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
2410840楼: Originally posted by yukai513 at 2011-04-25 21:13:46
可以通过测定NADH在340nm下的吸光度变化来测定酶活，反应液中以PEP为底物，加入下一步催化反应酶苹果酸脱氢酶，苹果酸脱氢酶催化草酰乙酸生成苹果酸消耗NADH，通过这个消耗NADH的变化来测定PEPC的酶活。我暂时用高效 ...

我是设定了2min内NADH吸光值的变化来测定PEPC的酶活，前三四十秒，吸光值下降很明显，以后几乎不变，这是怎么回事啊？谢谢啊！
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7楼2012-06-20 11:20:19
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gongsunhao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by jiaoliu007 at 2012-06-20 11:20:19
我是设定了2min内NADH吸光值的变化来测定PEPC的酶活，前三四十秒，吸光值下降很明显，以后几乎不变，这是怎么回事啊？谢谢啊！...

楼主目前进展如何啊，是否有稳定的方法了
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8楼2013-05-05 08:44:27
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馒头张

新虫 (初入文坛)
★
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楼主有没有完善的测酶活的方法呀，可不可以教我一下？目前实验正在准备中，多谢
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9楼2014-04-16 11:40:24
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梦如琉璃

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主有没有完整的测定方法，跪求，谢谢！
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10楼2017-06-14 13:28:48
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