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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于蛋白纯化
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zhyzx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rinp at 2010-08-24 10:20:36:
我觉得楼主可以把这两条带都切下来打下质谱看看是否同一个蛋白，如果是的话考虑该蛋白是不是有什么修饰或者少量降解导致出现了两条带，话说你这个很近到底有多进？1，2个kD？还是更少or更多
如果不是同一个蛋白就 ...

我把图片发出来了，大概80kD左右，其实是想做一下这个蛋白的活性的，如果没有活性，做下去的意义不大，现在就坐质谱的话有点浪费。
之前已近纯化过好几次了，开始的时候是只有一条带的，最近做的2次都是这种两条带的。
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21楼2010-08-24 17:01:26
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
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可能构象差异造成，过离子交换柱再看看
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22楼2010-08-24 18:11:32
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zhyzx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-24 18:11:32:
可能构象差异造成，过离子交换柱再看看

离子交换柱也不能过，盐离子浓度在200mM的时候蛋白就沉淀了，盐离子浓度太高啊
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23楼2010-08-24 21:35:56
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
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诶

这太悲剧了
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24楼2010-08-25 11:17:08
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zhyzx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-25 11:17:08:
诶

这太悲剧了

是啊，我郁闷啊
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25楼2010-08-25 14:22:39
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师
★
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引用回帖:
Originally posted by zhyzx at 2010-08-23 19:26:18:



恩，这倒是一种办法，可以考虑

有一些可以在线分析你的蛋白质（氨基酸序列），然后判断是否有信号肽的网站（就是在线软件）你可以查一下，一般是英文的！
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大家共同交流、共同提高！！！
26楼2010-08-27 05:56:59
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zhyzx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gene001 at 2010-08-27 05:56:59:

有一些可以在线分析你的蛋白质（氨基酸序列），然后判断是否有信号肽的网站（就是在线软件）你可以查一下，一般是英文的！

查了一下，好像是有一段信号肽的，在序列最前面的20个氨基酸附近，这样能解释通吗？
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27楼2010-08-27 10:30:45
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zboter

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是蛋白酶的切割
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28楼2010-08-27 10:41:10
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zhyzx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zboter at 2010-08-27 10:41:10:
可能是蛋白酶的切割

如果是这样的话，接着做这个蛋白的活性会有影响吗？
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29楼2010-08-27 10:56:37
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ruifei1985

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是你的东西有问题，有点变化
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四季很好，如果你在....
30楼2010-08-27 11:25:56
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