【求助/交流】关于蛋白纯化 - 分子生物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2010-08-23 14:12:35

zhyzx

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Originally posted by puma2003 at 2010-08-22 22:35:58:

你是过柱子？

是的，自己手动过的镍柱

12楼2010-08-23 14:13:11

puma2003

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Originally posted by zhyzx at 2010-08-23 14:13:11:

是的，自己手动过的镍柱

恩色谱有时候就是重复性差

13楼2010-08-23 14:54:44

gaogaoxing

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不像是蛋白中亚基断开了，电泳时操作是否规范啊？

14楼2010-08-23 15:42:17

zhyzx

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Originally posted by gaogaoxing at 2010-08-23 15:42:17:
不像是蛋白中亚基断开了，电泳时操作是否规范啊？

电泳操作应该没问题的

15楼2010-08-23 19:25:01

zhyzx

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Originally posted by gene001 at 2010-08-23 08:39:30:
你的蛋白质有没有带有信号肽等结构？要是有可能某些过程导致了部分蛋白的信号肽的切除，出现了大小相近的两条带！

这个还真不清楚呢，请教一下，这个怎么看呢？

16楼2010-08-23 19:25:45

zhyzx

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silicare:期待你的western结果 2010-08-24 18:32:22

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Originally posted by bunny0512 at 2010-08-23 09:39:43:
做WESTERN看看吧..

恩，这倒是一种办法，可以考虑

17楼2010-08-23 19:26:18

fjinliu

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silicare(金币+1):这种可能是存在的~ 2010-08-24 11:49:21

可能部分蛋白发生了糖基化修饰，和没发生修饰的部分会相比大小可能会有点变化的！如果是这种情况，就算是做Western 也同样会出现两条条带！

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18楼2010-08-24 10:02:33

rinp

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lstt09nk(金币+2):感谢回复，欢迎常来~~ 2010-08-24 11:01:50

我觉得楼主可以把这两条带都切下来打下质谱看看是否同一个蛋白，如果是的话考虑该蛋白是不是有什么修饰或者少量降解导致出现了两条带，话说你这个很近到底有多进？1，2个kD？还是更少or更多
如果不是同一个蛋白就再纯化一次就是了~~可能是杂蛋白污染或者其他偶然因素~

海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！

19楼2010-08-24 10:20:36

zhyzx

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Originally posted by fjinliu at 2010-08-24 10:02:33:
可能部分蛋白发生了糖基化修饰，和没发生修饰的部分会相比大小可能会有点变化的！如果是这种情况，就算是做Western 也同样会出现两条条带！

那如果是这种情况的话，该怎么办呢？

20楼2010-08-24 16:59:10