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111602木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】如何计算杂交的严谨度。
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我是作植物荧光原位杂交的，近来先了解如何确定杂交探针的杂交严谨度（如85%的严谨度，就是指 有15%的序列错配可能），他应该和southern相似，比如我用400bp 长度的探针做杂交其他条件如下： GC content of probe is 40%, The hybridization mixture consisted of 50% formamide, 2xSSC, and was denatured at 70 C for 10 min, Washing in 2xSSC, 50% formamide in 2xSSC at 40 C, 然后，我曾经看到一个公式计算Tm Tm=81.5 +0.41 (%GC content of probe) +16.6 log (molarity of monovalent cations)-500/(probe fragment length)-0.61(%formamide) =81.5+0.41x0.40+16.6 log 0.39 (0.3M Nacl+ 3x0.03M trisodium citrate right?)-500/400-0.61x0.5 =73.315 ( right?) 但是，后面如何计算杂交的严谨度呢？希望大家讨论。 |
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