| 查看: 832 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
xiaomu3811金虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】做touch down的专家能不能给小弟点建议
|
||
|
各位虫友，最近我做touch down PCR，想要将牛肝菌的磷酸盐转运蛋白基因克隆出来，可试了好多次，均没有明显成功迹象。现在我心里有点着急，所以想咨询下各位虫友，大家给点建议....谢谢.... 下面是我的pcr 反应体系：taq酶 0.5 uL 10*pcr buffer 5 uL dNTP 4 u L 简并引物1（100p） 1 uL 简并引物2（100p） 1 uL 模板（50ng/uL） 1 uL 补水 37.5 uL touch down 程序是： 94度 预变性 3分钟 94度 变性 30秒 60度到57度 退火 1分钟，并每降1度循环一次 72度 延伸 1分钟 接着 94度 变性 30秒 56度到54度 退火 1分钟，并每降1度循环四次 72度 延伸 1分钟 再接着 94度 变性 30秒 50度 退火 1分钟，并在此温度循环20次 72度 延伸 1分钟 最后在72度 运行 10分钟，结束后4度保存 总共程序运行两个小时左右，我设计的是简并引物（2个正向+1个反向），想要克隆的片段是300bp和600bp， 但是电泳检测有引物二聚体，并且还有个150左右bp大小的片段，就是没有我所需要的片段。请问各位大侠，我该怎么办呀....？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有274人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Touch Down PCR
已经有17人回复
- 和touchdownPCR有关的
已经有5人回复
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
3楼2010-08-15 22:12:52
2楼2010-08-15 21:01:31
silicare
荣誉版主 (文坛精英)
合伙创业版兼职版主
- MolEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 贵宾: 29.823
- 金币: 18946.3
- 散金: 24272
- 红花: 300
- 沙发: 88
- 帖子: 10222
- 在线: 1602.6小时
- 虫号: 948825
- 注册: 2010-01-26
- 专业: 摩尼教
- 管辖: 新药研发
4楼2010-08-16 08:42:33
30