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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急
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darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-12 00:41:06:
另外给些亲和层析内稍微提高浓度的做法：在洗杂蛋白的时候使用大量的buffer，充分洗，这样做会损失目的蛋白，却能提高纯度。

我试过了，用很多的buffer洗，但还是一样
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一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
11楼2010-08-11 23:53:05
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-12 18:03:02
引用回帖:
Originally posted by darwinxie at 2010-08-11 23:52:30:

什么蛋白都可以离子交换层析吗

理论上将蛋白应该都可以挂离子交换柱。多数蛋白都是酸性的，所以可以使用阴离子交换柱，如果蛋白是碱性的就使用阳离子交换柱。

操作过程中可以尝试，尝试不同的buffer，不同的填料，蛋白应该可以挂在柱子上。
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12楼2010-08-12 09:39:16
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-08-11 14:38:52:
有标签，亲和层析还有很多杂带就少见了。建议考虑下换标签，例如his-tag。

不建议像2楼说的用SDS-PAGE来做蛋白质回收，用SDS FREE的，不用做复性了，复性不是每个蛋白质都容易做得出来的。如果你的蛋白质表现出 ...

呵呵，忘了问他纯化蛋白的目的是什么了，还是你考虑的比较周全
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13楼2010-08-12 10:29:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-12 18:03:09
离子交换是很容易的，选好填料和pH值，100%能挂上。就是疏水有点难，现在我的淀粉酶挂上去的只有小半，正在努力提高吸附。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2010-08-12 15:30:59
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lihuixiang

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-08-11 14:38:52
有标签，亲和层析还有很多杂带就少见了。建议考虑下换标签，例如his-tag。

不建议像2楼说的用SDS-PAGE来做蛋白质回收，用SDS FREE的，不用做复性了，复性不是每个蛋白质都容易做得出来的。如果你的蛋白质表现出来 ...

请问下，你发的切胶回收蛋白的ＰＰＴ中，提到的，磨碎后４度浸泡过夜用的浸泡液是什么啊？
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坚持！
15楼2013-10-24 16:55:35
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by lihuixiang at 2013-10-24 16:55:35
请问下，你发的切胶回收蛋白的ＰＰＴ中，提到的，磨碎后４度浸泡过夜用的浸泡液是什么啊？...

水，或者低盐的缓冲液，例如20mM pH8.0的tris-hcl，前提是你的蛋白质必须在里面不变性。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
16楼2013-10-24 19:14:18
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