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一些关于禽流感的知识
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病毒的形态、结构与功能 典型的A型流感病毒粒子呈球型，直径为80～120nm， 平均为100nm。从家禽分离的流感病毒，有些毒株主要为球 形，而有些毒株为多形性，有的呈长丝状，有的为奇形怪状 的颗粒。流感病毒的多形性在病毒遗传学研究中可作为一种 遗传标志，但初分离的多形态的病毒粒子，经过鸡胚或细胞 培养物连续传代后主要变为球形【l 。流感病毒的囊膜由纤 突、双层类脂膜和基质蛋白构成。囊膜表面的纤突呈放射状 排列，纤突可分为两类，一类呈棒状，由血凝素(HA )分 子的三聚体构成，另一种呈蘑菇状，由神经氨酸酶(NA) 的四聚体构成。HA 和NA是病毒的两种主要保护性抗原。 HA 在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用，刺激机体产生的 中和抗体可中和病毒的感染，从而可以阻止禽流感的发生， HA在感染过程中可被水解为两条肽链HA 1和HA 2，是感 染细胞的先决条件。NA刺激机体产生的抗体虽然不能中和 病毒的感染，但可使病毒的释放量减少，进而使禽流感发生 的严重程度大大降低。HA 变异率高，是病毒发生抗原变异 的主要原因，具有亚型特异性：NA具有比HA 基因变异速 度慢的特点。基质蛋白是病毒粒子内的主要蛋白成分，其形 成的基质膜紧贴在类脂双层内面包围着核衣壳，是维持病毒 形态的结构蛋白。流感病毒的核衣壳呈螺旋对称，分为大小 不同的8个片段，核酸外被螺旋排列的壳粒，主要由核蛋白 构成 。 6 病毒的变异 A 型流感病毒每个核甘酸在每个复制周期中的突变机 率大约是1．5×10～，与其它RNA病毒的突变率相似。但是， 由于流感病毒的基因组分为8个不同的片段，在病毒增殖过 程中很容易发生基因重排，因而使流感病毒的抗原性和致病 性很容易发生变异。 6．1 抗原性变异流感病毒的抗原性很容易发生变异，主 要是为了逃脱宿主已获得的免疫。流感病毒的抗原性变异率 最高的是HA ，其次是NA。这两种抗原的变异可独力发生， 有时只涉及一个(HA或NA)，有时两个同时发生变异。 刘红旗等 ”为了解H9N2亚型禽流行性感冒(流感)病毒 在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异情况，对某鸡场 的感染鸡群进行连续4a的跟踪监测，对使用疫苗前和持续 使用疫苗后不同时段分离到的H9N2亚型禽流感病毒的HA基 因进行全序列分析。结果表明，在使用第一次分离的病毒株 制备的疫苗后8mo分离到的病毒株，其HA基因仅发生一个 氨基酸的差异：但在继续使用该疫苗的第二个和第三个年头 分离的病毒株，它们的HA基因则一直在发生较大的变化。 这一发现对进一步研究禽流感病毒在不断使用疫苗的选择 压力下发生变异的规律，指导制定正确的禽流感防制对策具 有重要意义。禽流感病毒抗原性变异的数量和幅度大小直接 影响其流行的规模，变异数量和幅度越大则流行规模越广 泛。这也是流感间隔一定时间又暴发的一个重要原因。 6．2 病毒基因组变异A型流感病毒有8个基因组片段， 当两个或两个以上的不同病毒粒子同时感染一个宿主细胞 时，在病毒的增殖过程中，不同病毒粒子的8个基因组片段 可以随机相互交换，从而发生核酸片段水平上的重新组合， 这种现象就称为基因重排。 郭元吉等【1 8】对一株从流感患儿中分离出禽H9N2流感 毒株的基因组特性进行了研究，其结果：A／广州／333／99 (H9N2)毒株的基因组属于禽流感病毒，但它明显不同于 A／Duck／HongKong／Y439／97毒株。同时不含有任何人流感病 毒基因节段，其基因组中有4个基因节段(分别编码HA、 NA、NP和NS蛋白)来自G9毒株基因系，而其余4个基 因节段(分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白)来自G1毒 株基因系。因此， 广~H／333／99(H9N2)病毒是G9和G1 毒株通过基因重配而来的重配株，它最大可能性直接来自 禽。这进一步证实了禽H9N2毒株能感染人，同时首次证实 了H9N2不同基因系毒株间，在自然界中也能发生基因重 配。 7 病毒的存活力 禽流感病毒对外界环境的抵抗力不强，与其它有囊膜病 毒一样，对高温、紫外线、各种消毒药敏感，容易被杀死。 流感病毒对不耐热，56℃加热30min、60℃加热10min、65—70 ℃加热数分钟，100*C加热lmin即丧失活性。紫外线照射、 阳光直射48h等多种方式均可杀灭该病毒。一般消毒药能很 快杀死病毒，据赵明秋等【1 9】报告杀死禽流感病毒的消毒药 物的最低浓度分别为：苯酚2％、消毒灵0．01％、氢氧化钠 l％、消毒劲0．05％、漂白粉0．5％、高锰酸钾0．02％、二氯 乙氰尿酸钠0．01％、百毒杀0．05％、新洁尔灭0．05％、福尔 马林4％、过氧乙酸0．02％。 在自然条件下，存在于有机物如粪便、鼻液、泪水、唾 液、尸体中的病毒能存活很长时间。如粪便中和鼻腔分泌物 中的病毒，其传染性在4"C可保持30—35d，20℃为7d。在 羽毛中存活l8d，在干骨头或组织中存活数周，在冷冻的禽 肉和骨髓中可存活10too[2】。禽流感病毒在水中存活时间较 长，在22"C水中可保持感染性4d，在0*C水中可保持感染 性30d以上，在冰冻湖水中能安全过冬 捌。 8 病原学诊断 目前用于诊断禽流感病毒的方法主要有：①血凝试验与 血凝抑制试验：用血凝试验(HA )和血凝抑制试验(HI) 可证实流感病毒的血凝活性及确定亚型。现多采用微量法。 准确的亚型鉴定还是需要特异性的H1一H15亚型的因子血 清进行交叉HI试验[211。②琼脂凝胶扩散试验：就是在琼脂 凝胶中进行的抗原抗体反应，该方法比较简便、快捷，即可 以定性(如免疫双扩散及免疫电泳中以沉淀线判定)，又可 以定量(如单辐射扩散)。由于所有的禽流感病毒都具有型 特异性RNA共同抗原，所以，可用一种禽流感病毒的抗原 或抗血清就可对所有A型禽流感病毒的抗体或抗原进行鉴 “ 。常用来进行疫病普查。③免疫荧光技术：免疫荧光技 术即荧光抗体(Fluoresent Andbody)技术，最早用于流感 病毒是鉴定和定位病毒感染细胞中特异性的抗原，主要是流 感病毒的核蛋白(NP)或基质蛋白(MP)抗原。用NP抗 原的荧光抗体染色，主要出现核内荧光；用MP抗原的荧光 抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光【2”。④酶联免疫 吸附实验(ELISA)：是用酶来标记抗原或抗体，通过显色 反应来检测相应抗体或抗原的一种方法。ELISA具有较高的 敏感性，既可以测定抗体，又可以测定抗原。尤其适合于大 批样品的血清学调查，可以标准化而且结果易于分析[22-23】。 在流感的控制、扑灭、检疫中很有用。⑤聚合酶链式反应 (PCR)：是一种更敏感特异的方法，可在数小时内使目的 基因扩增数百万倍，并且结合序列分析可对不同毒株进行比 较。Bashiruddin等 】报道了扩增HA 基因来分析致病株与 非致病株的序列差异，结果表明，致病株在HA 1的C末端 比非致病株多出3个碱性氨基酸(在HA 1和HA 2连接肽部 位)，显示了其在诊断和抗原分析上的应用前景。⑥荧光 RT—PCR．：本研究根据禽流感病毒H5亚型的RNA4节段， 设计、合成多对引物、探针，并通过筛选获得灵敏度、特异 性好的组合，在此基础上对荧光RT—PCR 反应体系中的各组 分进行优化，并建立对各种禽类样品中病毒核酸的提取方 法。通过对阳性鸡胚尿囊液及人工攻毒的SPF鸡、肉鸡、肉 鸭的各脏器进行检测，并与传统鸡胚病毒分离进行对比，显 示该方法与传统鸡胚病毒分离灵敏度接近，但检测时间由原 来的21d缩短为4h【251。 9 研究新进展 为了进一步防控禽流感，全球科技界加紧了对禽流感预 防和治疗的研究，并已经取得了一些新进展。我国华南农业 大学辛朝安教授的课题组在禽流感病原学研究方面已取得 新的突破。一是已成功分离与鉴定了最新的禽流感病原，通 过血清学等方法对病毒进行鉴定，证实其病原为H5N1亚型 禽流感病毒；二是应用分子生物学技术，对分离的H5N1亚 型禽流感病毒的8个基因片段设计多对特异引物，通过扩 增、测序后，获得该病毒100％基因图。这一成果可以帮助 人们了解禽流感病毒的演化过程：它可能是从哪里来的、目 前的致病率到了何种程度，并反映致病率的强弱以及禽流感 病毒跟其他流感病毒是否有重组的现象，从中可以推测出宿 主范围的变化情况。荷兰鹿特丹一家实验室已计划利用禽流 感病毒对猴子进行实验，在荷兰开展的实验还将对受禽流感 病毒感染的猴子进行尸体解剖，这项研究可能会给禽流感防 治提供重要信息。 |
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