【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~ - 分子生物 - 综合其他

人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。

91楼2010-09-07 11:06:57

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三磷酸腺苷

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Originally posted by dhd997 at 2010-09-07 11:06:57:
双X轴，难吗？

啥？不理解……你是说有不同量纲的轴？sigmaplot里面是可以实现两个图合并的

92楼2010-09-07 12:44:32

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yujiaping1

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-09-07 08:51:48:

这得看看是识别什么部位，只要不是识别N端就好了
抗体制备方面我不是很了解，我知道论坛有其他人是做这块的

我也不是自己制备抗体，打算送公司做，但后续的westblot要自己做，现在要自己表达蛋白，不知道该这些冗余序列对后续实验有什么影响

另外，表达去掉信号肽的蛋白，设计引物的时候，该怎么办，难道要顶头设计吗（就是说从需要的氨基酸所在的密码子开始选取序列），这样设计的引物未必好用啊，应该是包含成熟蛋白那样设计吧？但是前面冗余的氨基酸，我又不知道对后续实验是否有影响，说来说去，其实我问的还是一个问题？师兄你告诉我只要不是N端识别的就好，那westblot到底是不是N端识别的呢？

另外我想问一下，酶切位点的序列在设计引物的时候该怎样添加？直接添加在引物前面就行吗？为什么酶切位点很短，但是看别人的论文添加在引物前面的序列都很长？是保护碱基吗？

93楼2010-09-07 21:43:22

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feiye2214

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ATP，看看我的帖子呗
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94楼2010-09-07 22:59:53

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三磷酸腺苷

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Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-07 21:43:22:

我也不是自己制备抗体，打算送公司做，但后续的westblot要自己做，现在要自己表达蛋白，不知道该这些冗余序列对后续实验有什么影响

另外，表达去掉信号肽的蛋白，设计引物的时候，该怎么办，难道要顶头设计 ...

关于抗体制备的问题，我实在没法回答，自己不是干这块的
抗体有识别N端或C端或者中间某些氨基酸的

设计引物的话，其实克隆级的，只需要扩出条带就好，有杂带可以切胶，不怕引物评分不高或者dimer很多

酶切位点的5端当然还要加上保护碱基，一般3~4个，不同的酶要求不一样，你可以去查查fermentas公司有个表的

95楼2010-09-08 00:14:57

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三磷酸腺苷

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Originally posted by feiye2214 at 2010-09-07 22:59:53:
ATP，看看我的帖子呗
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已回~~不过没能完全解决问题

96楼2010-09-08 00:17:26

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hnndpt

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ATP你好，我想问几个问题：
基因文库筛选用的探针一般为多长的？我做的植物，设计引物扩增出保守序列做探针，自己再实验室进行探针标记操作简单吗？扩增出的双链CDNA标记成探针后是双链的还是单链的探针？
请多指教！

97楼2010-10-06 09:54:19

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Originally posted by hnndpt at 2010-10-06 09:54:19:
ATP你好，我想问几个问题：
基因文库筛选用的探针一般为多长的？我做的植物，设计引物扩增出保守序列做探针，自己再实验室进行探针标记操作简单吗？扩增出的双链CDNA标记成探针后是双链的还是单链的探针？
请多 ...

不好意思，我没有做过文库探针，这方面不是很清楚。
要不你去另外个答疑专帖，r版的那个问问？

98楼2010-10-06 10:07:43

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hnndpt

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好的，仍然很感谢！

99楼2010-10-06 11:34:40

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hnndpt

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我现在要确认一下某个结构基因在植物体内有几个拷贝，有两个问题不明白：
1.利用这个结构基因的保守序列做探针去检测结构基因的拷贝数*（sourthern），每个基因不是还有等位基因吗？会不会在检测的过程中把一对等位基因都检测出来，结果但拷贝的基因被误认为是2拷贝的？
2.我们平时检测的某个基因的表达量是不是一对等位基因的总表达量？