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dhd997

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双X轴,难吗?
人生不过几十年,成败荣辱都在天,是非恩怨莫在意,健康快乐最值钱,自古人间苦无边,看得高远境如仙,愿你不为凡事恼,轻松快乐每一天。
91楼2010-09-07 11:06:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-09-07 11:06:57:
双X轴,难吗?

啥?不理解……你是说有不同量纲的轴?sigmaplot里面是可以实现两个图合并的
92楼2010-09-07 12:44:32
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-09-07 08:51:48:


这得看看是识别什么部位,只要不是识别N端就好了
抗体制备方面我不是很了解,我知道论坛有其他人是做这块的

我也不是自己制备抗体,打算送公司做,但后续的westblot要自己做,现在要自己表达蛋白,不知道该这些冗余序列对后续实验有什么影响

另外,表达去掉信号肽的蛋白,设计引物的时候,该怎么办,难道要顶头设计吗(就是说从需要的氨基酸所在的密码子开始选取序列),这样设计的引物未必好用啊,应该是包含成熟蛋白那样设计吧?但是前面冗余的氨基酸,我又不知道对后续实验是否有影响,说来说去,其实我问的还是一个问题?师兄你告诉我只要不是N端识别的就好,那westblot到底是不是N端识别的呢?

另外我想问一下,酶切位点的序列在设计引物的时候该怎样添加?直接添加在引物前面就行吗?为什么酶切位点很短,但是看别人的论文添加在引物前面的序列都很长?是保护碱基吗?
93楼2010-09-07 21:43:22
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feiye2214

木虫 (正式写手)


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94楼2010-09-07 22:59:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-09-07 21:43:22:


我也不是自己制备抗体,打算送公司做,但后续的westblot要自己做,现在要自己表达蛋白,不知道该这些冗余序列对后续实验有什么影响

另外,表达去掉信号肽的蛋白,设计引物的时候,该怎么办,难道要顶头设计 ...

关于抗体制备的问题,我实在没法回答,自己不是干这块的
抗体有识别N端或C端或者中间某些氨基酸的

设计引物的话,其实克隆级的,只需要扩出条带就好,有杂带可以切胶,不怕引物评分不高或者dimer很多

酶切位点的5端当然还要加上保护碱基,一般3~4个,不同的酶要求不一样,你可以去查查fermentas公司有个表的
95楼2010-09-08 00:14:57
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by feiye2214 at 2010-09-07 22:59:53:
ATP,看看我的帖子呗
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2375960&fpage=1

已回~~不过没能完全解决问题
96楼2010-09-08 00:17:26
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


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ATP你好,我想问几个问题:
基因文库筛选用的探针一般为多长的?我做的植物,设计引物扩增出保守序列做探针,自己再实验室进行探针标记操作简单吗?扩增出的双链CDNA标记成探针后是双链的还是单链的探针?
请多指教!
97楼2010-10-06 09:54:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-10-06 09:54:19:
ATP你好,我想问几个问题:
基因文库筛选用的探针一般为多长的?我做的植物,设计引物扩增出保守序列做探针,自己再实验室进行探针标记操作简单吗?扩增出的双链CDNA标记成探针后是双链的还是单链的探针?
请多 ...

不好意思,我没有做过文库探针,这方面不是很清楚。
要不你去另外个答疑专帖,r版的那个问问?
98楼2010-10-06 10:07:43
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


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好的,仍然很感谢!
99楼2010-10-06 11:34:40
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我现在要确认一下某个结构基因在植物体内有几个拷贝,有两个问题不明白:
1.利用这个结构基因的保守序列做探针去检测结构基因的拷贝数*(sourthern),每个基因不是还有等位基因吗?会不会在检测的过程中把一对等位基因都检测出来,结果但拷贝的基因被误认为是2拷贝的?
2.我们平时检测的某个基因的表达量是不是一对等位基因的总表达量?
100楼2010-10-06 17:28:11
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