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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量 已有13人参与

宿主菌：BL21（DE3)
表达载体：PET-28a
目的蛋白：63KD
IPTG：终浓度为1mM
诱导温度是：37度
转速：200rmp
请大家多多指教，做了好几次都没有见效果。
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1楼 2010-08-02 11:03:06
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cpu2004

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:03:40
你这个不是培养条件的问题，需要换载体，而且需要在你目的产物N端或C端增加融合蛋白（你可以选择标签作为融合蛋白）。即便有信号肽使得你的蛋白分泌到胞外，用全菌蛋白也是能够检测到的，因为信号肽的效率绝对是低于pET系统生产效率的，全菌检测不到蛋白一般就是不表达。还有就是你产物太小的话直接降解也是检测不到的，另外产物太小有时候考马斯是染不出来的
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18楼2010-08-04 23:15:00
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
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2楼2010-08-02 13:23:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度，增加诱导时间试下
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3楼2010-08-02 14:21:23
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧，降低一下试一试？还有转速也降一下
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-02 18:45:51
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