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ap

金虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 403.7
散金: 12
红花: 3
帖子: 414
在线: 143.7小时
虫号: 485332
注册: 2007-12-27
性别: GG
专业: 微生物学

[交流] 【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因，难吗？已有10人参与

我提取黑曲霉基因组，PCR三段片段，分别为6kb，6kb，1.6kb。结果都是杂带，没有目的带。
而我以大肠基因组为模板PCR一段基因，却非常顺利。
是黑曲霉PCR引物我设计的不好？还是真菌基因组为模板的PCR本身就不好做？

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1楼 2010-07-30 11:28:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 53 (初中生)
金币: 3045.9
散金: 15
红花: 2
帖子: 394
在线: 311.7小时
虫号: 1130112
注册: 2010-10-23
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

如果为了检查基因组模板质量可以合成一对18S通用引物P一下看看，引物序列与条件网上都有，18S通用引物如果P不出来说明就是基因组质量有问题，重新氯仿抽提再乙醇沉淀~~~
另外，你说你的基因组浓度不高，可以直接加1~2μL到50的体系里面的，不用稀释~~~
如果18S PCR有结果目的基因木有结果，那就是其他的原因了，可以优化体系及反应条件，实在做不出来就换引物，重新设计合成引物，我从黑曲霉里面P一个1.8K的基因，优化了一个多月没有结果，换引物后一次就出来了~~~