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【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因,难吗?
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ap
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[交流]
【求助/交流】在真菌基因组中PCR基因,难吗?
已有10人参与
我提取黑曲霉基因组,PCR三段片段,分别为6kb,6kb,1.6kb。结果都是杂带,没有目的带。
而我以大肠基因组为模板PCR一段基因,却非常顺利。
是黑曲霉PCR引物我设计的不好?还是真菌基因组为模板的PCR本身就不好做?
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1楼
2010-07-30 11:28:05
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ap
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Originally posted by
glucidum
at 2010-08-04 10:02:00:
你的黑曲霉菌株是测序菌株吗?
如果是测序菌株那你主要应该考虑如何进行PCR体系优化,如各组分的浓度及反应温度等;如果不是测序菌株的话,那需要考虑一下你的菌株与测序菌株之间可能存在的差异,你根据测序菌株基因 ...
谢谢,我需要同时做两株菌。其中一株是ATCC1015,另一个是诱变株。
诱变株没有测序过,是要设计简并引物吗?需要注意哪些问题啊?
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15楼
2010-08-04 13:17:58
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qingxiong
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小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
是不是扩增的片段太长了呢?
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2楼
2010-07-30 12:00:24
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看天(金币+2):鼓励交流 2010-07-30 12:20:21
又或者是真菌模板质量不好呢,扩不出来有很多原因的,扩增体系,扩增条件优化了没有呢?
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3楼
2010-07-30 12:01:36
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Originally posted by
qingxiong
at 2010-07-30 12:01:36:
又或者是真菌模板质量不好呢,扩不出来有很多原因的,扩增体系,扩增条件优化了没有呢?
基因组好像提得不好,量很少。做过退火温度梯度和模板浓度梯度,都没有目的带。杂带是在退火温度低、模板浓度大的时候比较亮。
觉得主要还是引物的问题?关键是目的带就没有,杂带还挺亮的。很郁闷。
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4楼
2010-07-30 12:37:25
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