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半杯苦茶金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】固定化酶的底物量如何确定 已有3人参与
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| 现在在做固定化酶，发现之前的底物量不够，也可以说是浓度不够，后来就加大底物浓度，但是酶活还是在上升，现在比较缓慢了。我想请问一下，再做固定化酶的时候，底物量是如何活着根据什么实验来确定的，是不是加大底物浓度一直到酶活不上升为止呢？ |
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铁杆木虫 (著名写手)
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这样说吧，有两个概念有点混淆，你的底物指的是什么？固定化过程中酶的用量还是酶反应中底物的量 如果是固定化过程中酶的用量，你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的关系，一般这个用量是当你的loading capacity基本稳定后为止。但也不全是这样，你还应该考虑这时对于相同浓度反应底物的specific activity，因为不是loading越高，activity retention越好，由于surface coverage的影响。 如果指的是酶的底物，这个比较简单了。你只需要做出saturation curve，然后算出Vm&Km，甚至Kcat和Kcat/Km就好，不过需要比较游离核固定化的结果的。后续实验根据你saturation curve来决定。选择一个酶活性不错而且不会太浪费底物的浓度就好。 |
7楼2010-07-28 22:30:08
2楼2010-07-27 15:09:44
半杯苦茶
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