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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】固定化酶的底物量如何确定
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】固定化酶的底物量如何确定 已有3人参与

现在在做固定化酶，发现之前的底物量不够，也可以说是浓度不够，后来就加大底物浓度，但是酶活还是在上升，现在比较缓慢了。我想请问一下，再做固定化酶的时候，底物量是如何活着根据什么实验来确定的，是不是加大底物浓度一直到酶活不上升为止呢？
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1楼 2010-07-27 10:15:36
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看天

木虫 (知名作家)
★
scelab(金币+1):鼓励~ 2010-07-27 23:43:07
引用回帖:
Originally posted by 半杯苦茶 at 2010-07-27 10:15:36:
现在在做固定化酶，发现之前的底物量不够，也可以说是浓度不够，后来就加大底物浓度，但是酶活还是在上升，现在比较缓慢了。我想请问一下，再做固定化酶的时候，底物量是如何活着根据什么实验来确定的，是不是加大 ...

可以这样的 保证底物过量吧 如果有参数可以自己就是你大致的浓度
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-07-27 15:09:44
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-07-27 15:09:44:

可以这样的 保证底物过量吧 如果有参数可以自己就是你大致的浓度

因为底物就是溶液，所以我要是催化底物的时候还需要加PBS还是直接加底物溶液？
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3楼2010-07-27 23:04:09
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看天

木虫 (知名作家)
PBS是什么？在我的专范围中PBS是塑料
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2010-07-28 09:20:27
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-07-28 09:20:27:
PBS是什么？在我的专范围中PBS是塑料

磷酸缓冲液
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5楼2010-07-28 09:49:25
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看天

木虫 (知名作家)
半杯苦茶(金币+5): 2010-07-28 11:25:21
你的意思是底物是液态的吧 什么溶液 说的我不明白 那一般情况下都要在缓冲体系中进行反应的
再说你不加其他的缓冲液  相当于纯底物 浓度太高了吧
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
6楼2010-07-28 09:54:41
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很热心~~ 2010-07-29 10:00:38
这样说吧，有两个概念有点混淆，你的底物指的是什么？固定化过程中酶的用量还是酶反应中底物的量
如果是固定化过程中酶的用量，你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的关系，一般这个用量是当你的loading capacity基本稳定后为止。但也不全是这样，你还应该考虑这时对于相同浓度反应底物的specific activity，因为不是loading越高，activity retention越好，由于surface coverage的影响。
如果指的是酶的底物，这个比较简单了。你只需要做出saturation curve，然后算出Vm&Km，甚至Kcat和Kcat/Km就好，不过需要比较游离核固定化的结果的。后续实验根据你saturation curve来决定。选择一个酶活性不错而且不会太浪费底物的浓度就好。
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7楼2010-07-28 22:30:08
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-28 22:30:08:
这样说吧，有两个概念有点混淆，你的底物指的是什么？固定化过程中酶的用量还是酶反应中底物的量
如果是固定化过程中酶的用量，你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的关系，一般这个用量是当你的loadi ...

你说的很有道理 因为我是合成实验室的 主要做一些化学合成 但是我才研一 老板接了一个固定化的东西 我在做 酶方面的东西我不是很懂也不是很专业 不知道能不能把你的QQ号给我 我想加你好友 以后我有什么不懂的地方可以请教您！
如果你需要金币的话我可以定期给你一些 但是我的金币也不多 希望你别嫌少
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8楼2010-07-29 13:22:58
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 半杯苦茶 at 2010-07-29 13:22:58:

你说的很有道理 因为我是合成实验室的 主要做一些化学合成 但是我才研一 老板接了一个固定化的东西 我在做 酶方面的东西我不是很懂也不是很专业 不知道能不能把你的QQ号给我 我想加你好友 以后我有什么不懂的地 ...

给你站内信了，呵呵
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9楼2010-07-29 13:48:33
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