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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】固定化酶的底物量如何确定 已有3人参与

现在在做固定化酶,发现之前的底物量不够,也可以说是浓度不够,后来就加大底物浓度,但是酶活还是在上升,现在比较缓慢了。我想请问一下,再做固定化酶的时候,底物量是如何活着根据什么实验来确定的,是不是加大底物浓度一直到酶活不上升为止呢?
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看天

木虫 (知名作家)


scelab(金币+1):鼓励~ 2010-07-27 23:43:07
引用回帖:
Originally posted by 半杯苦茶 at 2010-07-27 10:15:36:
现在在做固定化酶,发现之前的底物量不够,也可以说是浓度不够,后来就加大底物浓度,但是酶活还是在上升,现在比较缓慢了。我想请问一下,再做固定化酶的时候,底物量是如何活着根据什么实验来确定的,是不是加大 ...

可以这样的 保证底物过量吧 如果有参数可以自己就是你大致的浓度
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
2楼2010-07-27 15:09:44
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-07-27 15:09:44:

可以这样的 保证底物过量吧 如果有参数可以自己就是你大致的浓度

因为底物就是溶液,所以我要是催化底物的时候还需要加PBS还是直接加底物溶液?
3楼2010-07-27 23:04:09
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看天

木虫 (知名作家)

PBS是什么?在我的专范围中PBS是塑料
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
4楼2010-07-28 09:20:27
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-07-28 09:20:27:
PBS是什么?在我的专范围中PBS是塑料

磷酸缓冲液
5楼2010-07-28 09:49:25
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看天

木虫 (知名作家)

半杯苦茶(金币+5): 2010-07-28 11:25:21
你的意思是底物是液态的吧 什么溶液 说的我不明白 那一般情况下都要在缓冲体系中进行反应的
再说你不加其他的缓冲液  相当于纯底物 浓度太高了吧
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
6楼2010-07-28 09:54:41
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):很热心~~ 2010-07-29 10:00:38
这样说吧,有两个概念有点混淆,你的底物指的是什么?固定化过程中酶的用量还是酶反应中底物的量
如果是固定化过程中酶的用量,你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的关系,一般这个用量是当你的loading capacity基本稳定后为止。但也不全是这样,你还应该考虑这时对于相同浓度反应底物的specific activity,因为不是loading越高,activity retention越好,由于surface coverage的影响。
如果指的是酶的底物,这个比较简单了。你只需要做出saturation curve,然后算出Vm&Km,甚至Kcat和Kcat/Km就好,不过需要比较游离核固定化的结果的。后续实验根据你saturation curve来决定。选择一个酶活性不错而且不会太浪费底物的浓度就好。
7楼2010-07-28 22:30:08
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半杯苦茶

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-28 22:30:08:
这样说吧,有两个概念有点混淆,你的底物指的是什么?固定化过程中酶的用量还是酶反应中底物的量
如果是固定化过程中酶的用量,你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的关系,一般这个用量是当你的loadi ...

你说的很有道理 因为我是合成实验室的 主要做一些化学合成 但是我才研一 老板接了一个固定化的东西 我在做 酶方面的东西我不是很懂也不是很专业 不知道能不能把你的QQ号给我 我想加你好友 以后我有什么不懂的地方可以请教您!
如果你需要金币的话我可以定期给你一些 但是我的金币也不多 希望你别嫌少
8楼2010-07-29 13:22:58
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 半杯苦茶 at 2010-07-29 13:22:58:

你说的很有道理 因为我是合成实验室的 主要做一些化学合成 但是我才研一 老板接了一个固定化的东西 我在做 酶方面的东西我不是很懂也不是很专业 不知道能不能把你的QQ号给我 我想加你好友 以后我有什么不懂的地 ...

给你站内信了,呵呵
9楼2010-07-29 13:48:33
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