| 查看: 3552 | 回复: 17 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】枯草芽孢杆菌电转化
|
|||
| 请高人指教：枯草芽孢杆菌电转化感受态的做法以及枯草芽孢杆菌电转化步骤 谢谢啦 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
shuangzi8761» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有61人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助新问题，从“枯草芽孢杆菌摇瓶接种子罐时菌龄和芽孢率 ”说开去
已经有19人回复
- 枯草芽孢杆菌涂布平板不生长怎么回事？
已经有16人回复
- 【求助/交流】枯草芽孢杆菌基因敲除~~
已经有9人回复
- 【求助/交流】求工业生产杀死枯草芽孢杆菌的方法
已经有10人回复
- 【求助/交流】有关于枯草芽孢杆菌形态
已经有19人回复
- 【求助/交流】枯草芽孢杆菌转外源基因
已经有18人回复
- 【专题】枯草芽孢杆菌
已经有25人回复
- 【求助/交流】如何使枯草芽孢杆菌产芽孢
已经有10人回复
- 【求助/交流】枯草芽孢杆菌的保存
已经有16人回复
- 【求助/交流】紧急求助枯草芽孢杆菌的选择培养基配方
已经有9人回复
- 求助枯草芽孢杆菌生长形态的问题
已经有7人回复
shuangzi8761
银虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 6472.4
- 散金: 798
- 红花: 8
- 帖子: 1549
- 在线: 309.3小时
- 虫号: 1449451
- 注册: 2011-10-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
9楼2011-10-20 09:14:18
shuangzi8761
银虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 6472.4
- 散金: 798
- 红花: 8
- 帖子: 1549
- 在线: 309.3小时
- 虫号: 1449451
- 注册: 2011-10-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2011-10-19 09:06:55
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 热心哈 2012-03-07 12:16:39
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 热心哈 2012-03-07 12:16:39
|
百度出来的，我也在做枯草的电转化，大致的过程是这样子，具体的参数还得自己慢慢摸索啊 枯草芽孢杆菌电转方案（高渗透法）转化 1）接种B . subtilis于3mlLB培养基中，过夜培养.。 2）取2.6ml过夜培养物接入40ml（LB+0.5M 山梨醇）中，37℃，200rpm培养至OD600=0.85~0.95. 3）将菌液冰水浴10 min，然后5000g，5 min，4℃离心收集菌体。 4）用50ml预冷的电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖），重新吹悬菌体，5000g，5min，4℃离心去上清，如此漂洗4次。 5）将洗涤后的菌体吹悬于1ml电转培养基中，每EP管分装120。 6）将60μl感受态细胞中加入50ngDNA（1~8μl），冰上孵育2min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。 电转仪设置：2.0kv,1mm,电击1次。（电击结果：时间常数=4.5~5.0ms,如果时间常数<4.2 ,则需要增加电转培养基的漂洗次数或者提高感受态的稀释倍数来获得更高的转化效率） 7）电击完毕取出杯子并立即加入1ml RM（LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇），37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养。 准备 40ml（LB+0.5M山梨醇）：蛋白胨10g/l , 酵母粉5g/l , NaCl 10g/l , 3.6g山梨醇pH=7.2 200ml电转培养基（0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%葡萄糖）：18g 山梨醇，18.5g甘露醇，20g葡萄糖。 10ml RM（0.5M山梨醇，0.38M甘露醇）：0.9g山梨醇，0.7g甘露醇。 2个50ml离心管，灭菌。 |
3楼2011-10-19 09:15:51
shuangzi8761
银虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 6472.4
- 散金: 798
- 红花: 8
- 帖子: 1549
- 在线: 309.3小时
- 虫号: 1449451
- 注册: 2011-10-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
4楼2011-10-19 10:30:16
