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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母菌体破碎
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姜大磊

木虫 (小有名气)
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Originally posted by susizheng at 2010-07-25 21:02:21:
前段时间刚试验了下，1.5 mL菌液收集菌体（发酵24 h以上），100 uL细胞裂解液，加入玻璃珠，漩涡10S，冰上10S，重复10次，上清制样跑PAGE没问题。
大量提取的话可超声+漩涡配合使用。

细胞裂解液是什么配方，能不能详细说一下步骤， 超声波破碎的时间及具体方法
邮箱：jiangdalei121121@163.com QQ：446394234
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
11楼2010-07-26 18:33:59
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2010-07-25 20:59:46:
我们实验室就做这个。玻璃珠是有卖的，SIGMA就有（不知道有无国产的）。还有要看楼主要多大粒径的玻璃珠，SIGMA至少有4种不同粒径的玻璃珠，玻璃珠还要分酸洗过的和未酸洗过的。还有，包装也差异很大，如果LZ实验 ...

细胞裂解液是什么配方，能不能详细说一下步骤， 超声波破碎的时间及具体方法
邮箱：jiangdalei121121@163.com QQ：446394234
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12楼2010-07-26 18:34:15
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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Originally posted by 姜大磊 at 2010-07-26 18:34:15:

细胞裂解液是什么配方，能不能详细说一下步骤， 超声波破碎的时间及具体方法
邮箱：jiangdalei121121@163.com QQ：446394234

Breaking Buffer        50 mM sodium phosphate, pH 7.4
1 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride or other protease inhibitors)
1 mM EDTA
5% glycerol
1.      Prepare a stock solution of your desired protease inhibitors and store
appropriately. Follow manufacturer's recommendations.  
2.      For 1 liter, dissolve in 900 ml deionized water:  
6 g sodium phosphate (monobasic), 372 mg EDTA, and 50 ml glycerol
3.      Use NaOH to adjust pH and bring up the volume to 1 liter. Store at 4°C.
4.      Right before use, add the protease inhibitors.
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Thank-you，so-blue.
13楼2010-07-26 18:36:00
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姜大磊

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-07-26 18:36:00:

Breaking Buffer        50 mM sodium phosphate, pH 7.4
1 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride or other protease inhibitors)
1 mM EDTA
5% glycerol
1.      Prepare a stock solution of your ...

我觉得大哥你上面给的是破碎液配方啊，我想请问大哥提取蛋白的具体步骤，能不能指教 一下，小弟急用！谢谢！ MSN：jiangdalei121121@163。com  QQ：446394234
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
14楼2010-07-27 08:37:49
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zj408694018

金虫 (正式写手)
可以不用加玻璃珠的，直接用超声裂菌，我一般都是那样做的，效果还不错，或者你也可以考虑用蜗牛酶破细胞
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15楼2010-07-27 08:50:33
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susizheng

木虫 (著名写手)

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Originally posted by 姜大磊 at 2010-07-27 08:37:49:

我觉得大哥你上面给的是破碎液配方啊，我想请问大哥提取蛋白的具体步骤，能不能指教 一下，小弟急用！谢谢！ MSN：jiangdalei121121@163。com  QQ：446394234

大哥，挂柱子纯化蛋白很容易查到资料啊，不外乎制粗酶液，柱活化，上柱，低浓度咪唑冲洗，高浓度咪唑洗脱，洗柱这些步骤啊，很容易查到相关文献。
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Thank-you，so-blue.
16楼2010-07-27 09:53:17
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lovibond

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫美食家

优秀区长优秀版主
同情楼主，没货确实是一个比较麻烦的问题，只能祝你实验顺利了
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充实的活着！
17楼2010-07-27 09:53:42
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zhmdwf

木虫 (著名写手)
浙江东芝有玻璃珠卖
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18楼2012-06-26 15:15:20
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dazey

新虫 (小有名气)
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15楼: Originally posted by zj408694018 at 2010-07-27 08:50:33
可以不用加玻璃珠的，直接用超声裂菌，我一般都是那样做的，效果还不错，或者你也可以考虑用蜗牛酶破细胞

你好，我需要酵母的此生代谢物，不需要提取蛋白或者DNA，只求破碎细胞，处理加入玻璃珠超声，还需要什么吗？
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19楼2013-05-06 11:00:15
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匿名

用户注销 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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20楼2013-05-06 16:38:23
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