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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你做的基因 别人做过原核表达么 有没有相关的文献 因为我做的一个基因就是原核表达没有产物 所有其他人的文献也是这么说的  大家最后用酵母表达的
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11楼2010-07-24 16:59:47
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louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那你就设个梯度吧
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12楼2010-07-25 10:16:21
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周_yan

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你应该再将连入的pet再测一次，看看正确不。再检查一下你的基因序列，在起始密码子之前是不是有终止密码子啊，导致你的基因无法表达。
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13楼2010-07-26 11:12:10
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sliping

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也遇到了和楼主一样的问题，不知什么原因，期待有更好的建议。
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14楼2010-07-26 11:23:48
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做什么原核呢，~啊~
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15楼2010-07-26 14:24:44
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C-JingX

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是用的28，诱导成功了的，但是奇怪的是，重组蛋白的大小比预计的小了几kDa，你试试缩短诱导时间，我才诱导了4个多小时，而且我的基因还很大，两千多kb
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走自己的路，不要追逐别人的脚步！
16楼2010-07-26 14:45:08
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姜大磊

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by C-JingX at 2010-07-26 14:45:08:
我也是用的28，诱导成功了的，但是奇怪的是，重组蛋白的大小比预计的小了几kDa，你试试缩短诱导时间，我才诱导了4个多小时，而且我的基因还很大，两千多kb

请问你诱导出来的蛋白是你想要的蛋白吗？活性怎么样啊？ 用的是多大的浓度的IPTG，谢谢@因为小弟也在做pET重组蛋白的诱导，谢谢。
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
17楼2010-07-26 17:58:11
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
当然有这种情况了 不表达 换一下载体 用MAL融合看看
这是蛋白异源表达性质决定的 楼主你确定你的测序 读码和连接没问题的情况下 与诱导时间和表达温度都无关的
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Bemühen Sie !
18楼2010-07-26 21:14:35
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maggie3277

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snzydong at 2010-07-24 16:59:47:
你做的基因 别人做过原核表达么 有没有相关的文献 因为我做的一个基因就是原核表达没有产物 所有其他人的文献也是这么说的  大家最后用酵母表达的

哎，我做的东西是自己筛出来的新基因，别人没做过的，所以也没啥可比性，现在纠结啊。
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19楼2010-07-27 10:07:45
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maggie3277

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-07-26 11:12:10:
你应该再将连入的pet再测一次，看看正确不。再检查一下你的基因序列，在起始密码子之前是不是有终止密码子啊，导致你的基因无法表达。

恩，现在已经又送去测序啦！还不知道结果怎么样。
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20楼2010-07-27 10:08:46
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