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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
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maggie3277

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与

请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？
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1楼 2010-07-23 22:04:49
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chemifunan

木虫 (正式写手)

海王小木虫
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-27 23:37:40
楼主啊 你还没测完序BLAST就先把载体构建啦 别着急么 测完序BLAST功能了再说
你确定你克隆到的已经是一个基因没有其他序列了？
16楼的同学 刚看到 是2k吧 2千k没这么大的基因 2k不是很大 蛋白八九十kD吧
我想问16楼的同学 小了几kD是怎么看出来的？
2k基因一般对应八九十kD的蛋白 跑PAGE怎么看出来只小了几kD
目标蛋白只要和诱导的对照对上了 和Marker稍有偏差是没关系的 除非质谱或蛋白测序才能较精确的定分子量
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Bemühen Sie !
25楼2010-07-27 10:59:17
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小白3521

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-23 23:53:32
测序正确吗？或者换一种表达菌株试一试看
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-07-23 23:28:47
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-24 06:18:43
LS说的对，你测序结果好么？
我一直不太喜欢28，更喜欢30点，呵呵
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3楼2010-07-24 00:11:56
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-07-24 12:45:46
我也遇到过一次，而且片段不是很长的那种。原来我用全长序列倒是表达出来了，只是量很低。后来就用了部分片段，没想到，就没有了。也不知道什么原因。
建议：首先保证测序正确（其实只要不发生移码突变之类，也应该表达出来啊）；你的序列是不是有稀有密码子；你的序列疏水区，信号肽，跨膜域这些都会影响表达；蛋白很大的话，也会影响它的表达。
不知道楼主是用来干什么呢？制备抗原，分析酶活？
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4楼2010-07-24 08:04:55
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