应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
53/1返回列表
查看: 5603  |  回复: 41
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

maggie3277

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与

请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-07-23 22:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maggie3277

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by chemifunan at 2010-07-26 21:14:35:
当然有这种情况了 不表达 换一下载体 用MAL融合看看
这是蛋白异源表达性质决定的 楼主你确定你的测序 读码和连接没问题的情况下 与诱导时间和表达温度都无关的

恩，同感，再不行，我就要重新构建啦！
得研究下融合表达的相关知识了，以前没做过。
赞一下 回复此楼
22楼2010-07-27 10:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 42 个回答

小白3521

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-23 23:53:32
测序正确吗？或者换一种表达菌株试一试看
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-07-23 23:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-24 06:18:43
LS说的对，你测序结果好么？
我一直不太喜欢28，更喜欢30点，呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-07-24 00:11:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-07-24 12:45:46
我也遇到过一次，而且片段不是很长的那种。原来我用全长序列倒是表达出来了，只是量很低。后来就用了部分片段，没想到，就没有了。也不知道什么原因。
建议：首先保证测序正确（其实只要不发生移码突变之类，也应该表达出来啊）；你的序列是不是有稀有密码子；你的序列疏水区，信号肽，跨膜域这些都会影响表达；蛋白很大的话，也会影响它的表达。
不知道楼主是用来干什么呢？制备抗原，分析酶活？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-24 08:04:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 42 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭