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可可猫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR失败了一次又一次了啊 已有18人参与

刚刚开始做PCR的时候,简直是RP大爆发,每次都能P出来。

结果近一个月,东西完全一样,却完全P不出来了,Maker都跑得出来。
本来以为是taq酶失活了,买了新的,还是P不出来。TAE用的也是新鲜的。准备重新稀释一管模板来用看看。
求助各位师兄师姐,一般P不出来还有那些没考虑到呢。
~~~~(>_<~~~~
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-23 11:17:21
引物反复冻融会降解咩?可是保存在-20℃,每次用都是要融化的啊,疑惑中....


会降解的,你可以分装成一大一小两管,平时用小管,大管储存;
模板放长了吧,也会降解的,要新的模板;
最好还用以前的酶会好一些
上邪!我欲与君相知,长命无绝衰。山无陵,江水为竭,冬雷震震,夏雨雪,天地合,乃敢与君绝!
14楼2010-07-23 10:43:10
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-23 07:00:26
marker跑出来了就不是跑胶的问题。
模板有没有讲解?PCR仪的问题(原来我们实验室有次就是PCR仪的控温系统出问题了)?引物是不是错了等等,说不定 哪里出了点小问题。呵呵,没准是粗心闹得
2楼2010-07-22 14:13:44
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-23 07:00:33
引物是不是反复冻融而降解了?重新用储液稀释试试
3楼2010-07-22 14:14:30
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love_st

金虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
肯定是你的某个小环节出现纰漏,回去仔细查下,应该不难找出原因
4楼2010-07-22 14:18:35
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