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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR失败了一次又一次了啊
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可可猫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR失败了一次又一次了啊 已有18人参与

刚刚开始做PCR的时候，简直是RP大爆发，每次都能P出来。

结果近一个月，东西完全一样，却完全P不出来了，Maker都跑得出来。
本来以为是taq酶失活了，买了新的，还是P不出来。TAE用的也是新鲜的。准备重新稀释一管模板来用看看。
求助各位师兄师姐，一般P不出来还有那些没考虑到呢。
~~~~(>_<~~~~
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1楼 2010-07-22 14:09:58
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-23 07:00:26
marker跑出来了就不是跑胶的问题。
模板有没有讲解？PCR仪的问题（原来我们实验室有次就是PCR仪的控温系统出问题了）？引物是不是错了等等，说不定 哪里出了点小问题。呵呵，没准是粗心闹得
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2楼2010-07-22 14:13:44
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-23 07:00:33
引物是不是反复冻融而降解了？重新用储液稀释试试
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3楼2010-07-22 14:14:30
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
肯定是你的某个小环节出现纰漏，回去仔细查下，应该不难找出原因
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4楼2010-07-22 14:18:35
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cty1984

木虫 (著名写手)

小书童
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对照刚开始做的，把每一个细节对照一下，PCR就是这样，一点粗心就可能产生很大问题
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坚持就是胜利！
5楼2010-07-22 14:28:02
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可可猫

铜虫 (小有名气)
引物反复冻融会降解咩？可是保存在-20℃，每次用都是要融化的啊，疑惑中....
引物应该是不会错的，之前P得挺好的，都是同一批

上面有TX提到机器问题，我们确实是才换了PCR仪，我也确实是换了仪器之后做不出来，但是其他人的能出来，代表不是仪器的问题吧？
~~~~(>_<~~~~
至于是不是粗心.....我已经P到要吐了，每一步都很小心的，应该不是很可能吧....
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6楼2010-07-22 14:31:22
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板最容易出问题了，那就看看模板吧
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7楼2010-07-22 15:18:09
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cthgj

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物问题吧。。。。
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8楼2010-07-22 22:00:51
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dNTP?
Mg2+ CONCENTRATION?
PCR machines? did your colleague work well with this machine? let the other people do one time for you
did you get primer dimers?
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
9楼2010-07-22 22:09:59
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xiaoshch26
lstt09nk:交流贴请勿纯表！！ 2010-07-23 11:14:52
10楼2010-07-22 22:24:44
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