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【求助/交流】求分享叶盘法根癌农杆菌农杆菌介导的烟草转化体系 已有1人参与
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求大家分享。做这个好几批了，可是长的都不好，没有获得抗性株，抗性芽一移栽就死了，也不知是抗性芽为假阳性还是培养基出了问题，亦或是筛选比较不对？ 我们用的是pCAMBIA1301载体，潮霉素筛选的。 大家有比较成熟的烟草转化体系请分享下吧。越详细越好， 1.所用的质粒、筛选用抗生素？ 2.叶盘大小，叶盘部位选择，愈伤组织培养的培养基配方、培养天数、温度、光周期？ 3.农杆菌的浓度（OD值达到多少？），侵染液配方、pH值、侵染时间？ 4.共培养条件、时间，所用培养基？ 5.分化培养的培养基、温度、光周期、大约多长时间能长出抗性芽？农杆菌如何抑制？ 6.抗性芽长至多大时转至生根培养基？如何分离抗性芽、直接用镊子夹下吗？生根培养基配方？ 谢谢大家，实在是没辙了。我在北京，我们实验室以前没做过这些，现在做起来太费劲了。请大家帮忙。 |
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